[发明专利]甘薯组织培养外植体的灭菌方法

说明书

本发明公开了一种甘薯组织培养外植体的灭菌方法。所述方法利用NaClO溶液和浓盐酸反应所得Cl₂，以浓度为0.33～1.3mol/m³的Cl₂对甘薯组织培养外植体进行表面灭菌1～10min。本发明采用Cl₂对甘薯茎段外植体进行灭菌，可同时对大量不同的外植体材料一次性灭菌，灭菌耗时短，过程简便，不需无菌水进行冲洗，灭菌效率高。灭菌后外植体5d左右即可生根发芽，茎段再生率100％，并保持了外植体的正常萌芽和生根。

技术领域

本发明属于甘薯组织培养技术领域，涉及一种甘薯组织培养外植体的灭菌方法。

背景技术

甘薯是无性繁殖的块根作物，常规种质资源繁殖、保存和交换等主要通过甘薯块根进行。但因薯块不耐藏、体积大、不易运输等缺点，通过薯块进行保存和交换材料存在诸多弊端。随着植物组织培养技术日趋成熟，采用组织培养方式可在短时间内快速扩繁大量种苗，且不受季节和环境等因素的约束，实践证明，每茎段每月可扩繁5倍，一年可繁殖5⁸～5¹⁰。

在外植体选择上，理论上植株所有器官均可作为组织培养外植体，目前甘薯组织培养外植体主要是茎尖。外植体灭菌主要利用氯化汞和酒精，具体方法是外植体用清水洗净后，先用75％乙醇灭菌30s，然后用0.1％氯化汞(HgCl)灭菌10min，最后用无菌水冲洗4～5次。该方法虽灭菌效果好，但灭菌过程繁琐，且消毒液升汞含重金属离子，大部分实验室升汞消毒液不经处理直接填埋或排入下水管道，对地下水和环境造成严重汞污染。

发明内容

本发明的目的在于提供一种安全且高效的甘薯组织培养外植体的灭菌方法。该方法利用NaClO和浓盐酸反应获得Cl₂的方法对甘薯组织培养外植体表面进行灭菌。5min可对上百个株系灭菌处理，灭菌效果高、效率高。

实现本发明目的的技术方案如下：

甘薯组织培养外植体的灭菌方法，采用氯气对甘薯组织培养外植体进行表面灭菌。

在具体实施例中，本发明利用NaClO溶液和浓盐酸反应所得Cl₂对甘薯组织培养外植体进行表面灭菌。

所述的甘薯组织培养外植体可以是甘薯茎段。

为提高灭菌效率，采用浓度为0.33～1.3mol/m³的Cl₂对甘薯组织培养外植体表面进行灭菌，优选Cl₂浓度为0.66～1.3mol/m³。

为获得较好的处理效果，采用Cl₂灭菌外植体的时间分别为1～10min，优选为

5～10min。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

本发明采用NaClO和浓盐酸反应获得Cl₂的方法对甘薯茎段外植体进行灭菌，可同时对大量不同的外植体材料一次性灭菌，灭菌耗时短，过程简便，不需无菌水进行冲洗，灭菌效率高。灭菌后外植体5d左右即可生根发芽，茎段再生率100％。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面通过实施例，对本发明进行进一步详细说明。但是应该理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限制本发明的范围。

下述实施方式中所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施方式中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

甘薯品种为江苏徐州甘薯研究中心选育的高花青素甘薯新品种徐紫薯8号。试验地点为江苏徐州农业部甘薯生物学与遗传育种重点实验室。