[发明专利]一种可修复皮肤的干细胞外泌体及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种可修复皮肤的干细胞外泌体及其制备方法和应用，其中制备方法为将十肽‑12转导入间充质干细胞外泌体中，即得到可修复皮肤的干细胞外泌体。通过本发明制备的可修复皮肤的干细胞外泌体，首次发现将间充质干细胞外泌体和十肽‑12进行结合，利用外泌体细胞的负载能力和较低的免疫原性，不仅可以使十肽‑12到达黑素细胞进而抑制酪氨酸酶活性，还能够能够调节炎症反应，促进皮肤相关细胞再生。本发明制备的可修复皮肤的干细胞外泌体应用于晒伤后的皮肤能达到消除红斑、水肿的效果，更能减少黑色素的生成进而减少色素沉积及晒伤后黑斑的形成，可在化妆品以及治疗皮肤疾病药物等领域使用，具有显著的效果并具有重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及生物细胞技术领域，特别涉及一种可修复皮肤的干细胞外泌体及其制备方法和应用。

背景技术

太阳光是由不同波长的光波组成的，其中，中波紫外线(UVB)能到达表皮的基底层，强烈照晒将造成表皮角质细胞坏死，且释放组胺、5-羟色胺、激肽等炎症介质，进而导致真皮血管扩张和组织水肿，继之黑素细胞加速合成色素，使皮肤色素加深。日晒后皮肤晒伤主要表现为局部皮肤出现红斑、水肿或水疱，愈后留有色素沉着斑，并伴有烧灼、疼痛感。

研究表明，UVB不仅能直接损伤细胞，且受损细胞所释放的受到损伤的microRNA会作为皮肤被晒伤的信号释放出来，并激发邻近的健康细胞，从而引发炎症(Bernard etal.,2012)。同样接受UVB照射后的皮肤角质细胞所分泌的外泌体，将诱导黑素细胞(melanocyte)生成色素，进而表现出晒后皮肤色素加深(Lo Cicero et al.,2015)。更为严重的是，紫外照射后的炎症反应能促进黑色素瘤的血管定向和转移(Bald et al.,2014)，进一步增加黑色素瘤的转移。总之，皮肤晒伤将诱导炎症反应，直接表现为红斑、水肿，以及黑素细胞增加、色素合成加重导致皮肤颜色加深及形成色素沉积斑等问题。

现有的防晒物质中，如十肽-12(英文名Decapeptide-12，商品名Lumixyl或露明斯)，其氨基酸序列为YRSRKYSSWY，是一种新型高效且细胞毒性极低的酪氨酸酶抑制剂，作为化妆品原料添加到化妆品中可以有效抑制黑色素的生成。然而，现有的防晒物质仅对抑制黑色素生成具有一定作用，却难以对已晒伤后的皮肤起到良好的修复作用。

发明内容

为解决上述背景技术中提到的问题，本发明提供一种可修复皮肤的干细胞外泌体的制备方法，方法为：将十肽-12转导入间充质干细胞外泌体中，即得到可修复皮肤的干细胞外泌体。

进一步地，所述间充质干细胞外泌体包括脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞和脂肪间充质干细胞。

进一步地，将十肽-12转导入间充质干细胞外泌体中包括以下步骤：

步骤a、将间充质干细胞外泌体溶于含有海藻糖的PBS缓冲液中，形成混合液M1；

步骤b、将M1和十肽-12分别加入电穿孔皿中，放入电穿孔仪，进行电穿孔转导；

步骤c、转导后采用PBS缓冲液洗涤，用含有海藻糖的PBS缓冲溶液重悬沉淀，即得到可修复皮肤的干细胞外泌体。

进一步地，步骤b中，进行电穿孔转导时，电压为400V，电容为250μF。

进一步地，用PBS缓冲溶液重悬沉淀后，于-80℃以下冻存后，转移至真空冻干仓中冻干，得到可修复皮肤的干细胞外泌体的冻干粉后，进行保存以备用。

进一步地，所述真空冻干仓的的真空度为10Pa，温度为-45℃，冷冻时间为12h-48h。

本发明还提供一种如上任意所述制备方法所制备的可修复皮肤的干细胞外泌体。

本发明还提供一种如上任意所述制备方法所制备的可修复皮肤的干细胞外泌体在制备化妆品上的应用。