[发明专利]一种利用氮化硼量子点-金纳米粒子纳米复合物检测人血清中乙酰胆碱酯酶含量的方法

说明书

本发明公开了一种利用氮化硼量子点‑金纳米粒子纳米复合物检测人血清中乙酰胆碱酯酶含量的方法。该方法包括以下步骤：1）建立荧光强度与乙酰胆碱酯酶浓度的标准曲线：①先制备碘化乙酰胆碱‑氮化硼量子点溶液；②向碘化乙酰胆碱‑氮化硼量子点溶液中分别加入相同体积不同浓度的乙酰胆碱酯酶溶液，随后加入HAuCl₄，混合均匀；将一系列混合溶液反应后，分别测定溶液的荧光强度，绘制荧光强度与乙酰胆碱酯酶浓度的标准曲线，得线性回归方程；2）将待测血清样品按照步骤②的方法制成混合溶液，测定荧光强度；将荧光强度代入线性回归方程中，得到乙酰胆碱酯酶浓度。该方法可以应用到人血清样本的实际检测，具有步骤简单、快速和灵敏的特点。

技术领域

本发明属于分析化学和纳米技术领域，具体涉及一种利用氮化硼量子点-金纳米粒子纳米复合物检测人血清中乙酰胆碱酯酶含量的方法。

背景技术

乙酰胆碱酯酶（AChE）是生物神经信号传输过程中一种非常关键的酶，这种酶通过将碘化乙酰胆碱（ATCh）分解为硫代胆碱（TCh）来减弱神经递质对突触后膜的兴奋作用，从而确保体内神经信号的正常传递。AChE还参与细胞的发育和成熟，从而促进神经元发育和神经再生。 值得注意的是，神经毒气，阿尔茨海默病（AD）药物和有机磷农药（OPs）可以抑制AChE的活性，并导致ATCh在突触间隙积累，阻碍神经递质的传输。调节AChE的水平对于维持正常的生理活动十分重要。因此，从理论和实践两个方面，简单，快速和准确的测定AChE的含量并筛选潜在抑制剂具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于针对目前大多数检测方法具有繁琐的操作程序，耗时，标记和低灵敏度的缺点，提供了一种利用氮化硼量子点-金纳米粒子纳米复合物检测人血清中乙酰胆碱酯酶含量的方法。本发明的检测方法步骤简单，快速，无标记且灵敏；该传感器基于AChE调节合成的AuNPs能猝灭BNQDs荧光特点，以实现对血清样本中AChE含量的检测，其方法高效、快速、免标记、灵敏，适用于临床诊断。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种利用氮化硼量子点-金纳米粒子纳米复合物检测人血清中乙酰胆碱酯酶含量的方法，包括以下步骤：

1）建立荧光强度与乙酰胆碱酯酶浓度的标准曲线：

①配制0.1mg/ml碘化乙酰胆碱-氮化硼量子点溶液；

②向100μL 0.1mg/ml碘化乙酰胆碱-氮化硼量子点溶液中分别加入50μL不同浓度的乙酰胆碱酯酶溶液，随后加入50μL 0.8mM HAuCl₄溶液，混合均匀；将一系列混合溶液在37℃下反应32 min后，分别测定溶液的荧光强度，绘制荧光强度与乙酰胆碱酯酶浓度的标准曲线，得线性回归方程；

2）向100μL 0.1mg/ml 碘化乙酰胆碱-氮化硼量子点溶液中加入50μL稀释后的待测血清，随后加入50μL 0.8mM HAuCl₄，混合均匀；将混合溶液在37℃下反应32 min后，测定溶液的荧光强度，将荧光强度代入步骤②的线性回归方程中，得到乙酰胆碱酯酶浓度，经过换算得到未经稀释的原待测血清中的乙酰胆碱酯酶含量。

步骤①具体为：向氮化硼量子点溶液中加入碘化乙酰胆碱，氮化硼量子点与碘化乙酰胆碱的摩尔比为1:1.5，混合振荡1h，溶液通过透析袋去除未键合的碘化乙酰胆碱，得到0.1mg/ml碘化乙酰胆碱-氮化硼量子点溶液。

步骤②中乙酰胆碱酯酶溶液的浓度范围为0.05~10 mU/mL。

步骤②所述的线性回归方程为：FL=406.11-49.52C，R²=0.997。

该方法对乙酰胆碱酯酶的响应范围为0.05-6 mU/mL，检测限LOD为0.0212 mU/mL。

该方法的作用机理为：