[发明专利]一种测定人血清甘胆酸含量的试剂

说明书

本发明公开了一种测定人血清甘胆酸含量的试剂，包括试剂1和试剂2，其中试剂1是由0.04%的胶乳微球‑BSA‑甘胆酸偶联物，并添加辅剂100mM,pH8.0的磷酸盐缓冲液，0.9%的氯化钠溶液，0.1%的BSA，0.1%的表面活性剂和稳定剂配制而成；试剂2是由1%的胶乳微球‑鼠抗甘胆酸单克隆抗体偶联物并添加辅剂100mM,pH8.0的磷酸盐缓冲液，0.9%的氯化钠溶液，0.1%的BSA，0.1%的表面活性剂和稳定剂配制而成。本发明将胶乳微球引入到试剂中，当试剂1和试剂2均存在有胶乳微球时，对试剂检测灵敏度的提高会更加显著。由于试剂1和试剂2均存在有胶乳微球，会相应的提高试剂的空白吸光度；因此试剂1和试剂2中的胶乳浓度需要进行精确控制。

技术领域

本发明涉及生物检测试剂，尤其是涉及一种应用胶乳免疫比浊技术测定人血清甘胆酸含量的试剂 。

背景技术

血清甘胆酸（Cholyglycine, CG，分子量465.6）属于胆汁酸的一种。胆汁酸包括一大类的胆烷酸，在胆汁中主要有胆酸(CA)、鹅脱氧胆酸(CDCA)、脱氧胆酸(DCA)，还有少量石胆酸(LCA)及微量熊脱氧胆酸(UDCA)，各种胆烷酸都可能和甘氨酸、牛磺酸结合成为结合形态，这是肝脏分泌到胆汁中的主要形式。各种胆汁酸，不论是游离态还是结合态，其分子内部都是既含亲水基团(羟基、羧基、磺酰基)，又含疏水基团(甲基及烃核)，故胆汁酸的立体构型具有亲水和疏水两个侧面，因而使胆汁酸表现出很强的界面活性。它能降低脂、水两相之间的表面张力，促进脂类形成混合微团，这对脂类物质的消化吸收以及维持胆汁中胆固醇的溶解都起重要作用。

血清甘胆酸在肝脏内合成，存储于胆囊内，在消化过程中由肠道吸收，绝大多数经门静脉被肝脏重新吸收，最终构成肝-胆-肠-静脉-肝的循环。当肝脏受到外部损坏或者疾病影响功能时，肝脏对血清甘胆酸的重吸收下降，会导致血清甘胆酸升高；当胆囊出现堵塞时，肝脏内的甘胆酸不能及时排泄到肠道内，导致返流入血液系统，也会引起血清甘胆酸升高；当肠道吸收功能受损时，也会影响血清甘胆酸的含量。因此，血清甘胆酸含量的高低能直接反馈肝胆系统的生理功能是否正常。

在临床上往往用血清甘胆酸的测定来判断孕妇是否患有胆汁淤积症。正常情况下，在妊娠后期，整个胎盘的增大会压迫各个内脏如心脏、肺、胃以及肝脏等器官，引起一系列的问题如下肢水肿、呼吸急促等。而对肝脏的压迫会影响肝脏胆汁的分泌，从而导致血清甘胆酸升高。因此，孕妇血清甘胆酸的参考值范围显著有别于正常人。同时，孕妇血清甘胆酸的测定能直接反馈肝脏内胆汁淤积的程度。胆汁淤积症常有家族史，具有一定的遗传特征，患有胆汁淤积症的孕妇自身情况较为良好，主要会出现皮肤瘙痒及轻度黄疸，但分娩之后症状迅速消失，但对胎儿有较大的影响，容易引起早产、低体重儿、胎儿宫内窘迫死亡及新生儿窒息等症状。因此及时准确的检测甘胆酸含量对孕妇特别是对胎儿的健康有及时的诊断意义。

目前临床对血清甘胆酸的诊断主要有放射免疫分析法、酶联免疫法、化学发光免疫分析法及均相酶免疫分析法等。

放射免疫分析法采用放射性元素标记甘胆酸，与样本中的甘胆酸竞争试剂中的抗体，通过分析与抗体发生反应的甘胆酸中反射性元素含量的高低来反馈样本中甘胆酸的试剂浓度。此法准确性较高，标记甘胆酸与正常甘胆酸对抗体的结合性能没有显著差异。但反射性元素的效期较短，后期废弃物难以处理，此方法现已逐步被市场淘汰。

酶联免疫法采用双抗体夹心的方法来检测甘胆酸，并通过酶联放大的效果来增大试剂灵敏度，具有灵敏度高的优点。但此方法反应时间较长，结果为半定量，不能满足市场上大规模筛查的需求。

化学发光免疫分析法原理与酶联免疫法类似，通过化学发光的方法取代酶联放大来增大试剂灵敏度。此法较酶联免疫灵敏度提高，准确性也相应提高，结果为定量结果，但目前为止，此法成本还是较高，市场推广有一定压力。