[发明专利]一种促进黄曲霉菌快速产孢的方法

说明书

本发明公开了一种促进黄曲霉菌快速产孢的方法。以石墨烯掺杂的固体培养基作培养基，诱导黄曲霉菌的菌丝体快速产孢。本发明的优点是黄曲霉菌菌丝体产孢实验周期缩短，在48～72小时内能迅速诱导黄曲霉菌菌丝体大量产孢。为后期黄曲霉菌研究奠定良好基础，为科研工作者节约了大量的宝贵时间，具有较高的应用潜力。

技术领域

本发明属于生命科学技术领域，特别涉及一种黄曲霉菌的快速产孢方法。

背景技术

由曲霉属真菌(特别是黄曲霉)引起的毒素污染统称曲霉菌毒素污染，寄主范围广，致使黄曲霉毒素广泛存在于大米、玉米、花生、芝麻、大豆、菜籽等粮油食品中，严重威胁人类的生命健康。目前，在实验室一般采用平板培养菌丝、自然产孢后制备黄曲霉菌孢子悬浮液，但其菌丝培养时间较长，通常需要7天，由于培养时间长，容易造成污染，菌丝产孢效率低，导致严重影响相关科研进度。关于黄曲霉菌孢子的研究极为普遍，它对黄曲霉毒素产生机理，作物抗侵染作用，以及生防菌或天然产物抑制机理等的研究极为重要。获得大量孢子的速度在很大程度上决定着黄曲霉毒素防控研究的进展。快速获得大量孢子，诱导黄曲霉菌产孢，可以为科研工作者提供充分的实验材料。

发明内容

本发明的目的是提供一种简易可行的方法快速诱导黄曲霉菌菌丝体产孢。

为了实现以上目的，本发明的技术方案如下：

一种黄曲霉菌的快速产孢方法，以石墨烯掺杂的固体培养基作培养基，诱导黄曲霉菌的菌丝体快速产孢。

按上述方案，所述的快速产孢方法具体为：将黄曲霉菌活化，转接到固体培养基培养，然后将培养得到的菌丝体移植到石墨烯掺杂的固体培养基上诱导产胞。

按上述方案，所述诱导产胞的培养温度28±3℃，培养时间48～72h。

按上述方案，所述石墨烯横向尺寸为5nm～5μm。具体可选择横向尺度500nm～5μm的大片层石墨烯，横向尺度5～200nm的小片层石墨烯。

按上述方案，所述石墨烯优选为横向尺度5～200nm的小片层石墨烯，更优选为横向尺度5～15nm的小片层石墨烯。

按上述方案，所述石墨烯掺杂的固体培养基的制备方法：石墨烯水溶液与经灭菌后还未完全冷却的固体培养基溶液混合，迅速摇匀后，倒入平板冷却制成。混合温度可为40-50℃。

按上述方案，所述的石墨烯选择大片层石墨烯时，将大片层石墨烯按一定浓度溶于超纯水中，超声至均一后，再经过离心后取上清，经灭菌后制成石墨烯水溶液；

所述的石墨烯选择小片层石墨烯时，将小片层石墨烯按一定浓度溶解在无菌水中，滤膜过滤后制成石墨烯水溶液。滤膜的孔径具体可为0.22μm。

按上述方案，所述的灭菌为121℃灭菌30min。

按上述方案，固体培养基是常规的真菌培养基，可以是PDA固体培养基、沙氏固体培养基、查氏固体培养基、曲霉素琼脂基础(AFPA)培养基、马铃薯蛋白固体培养基、燕麦片固体培养基、玉米粉固体培养基、麦芽浸膏固体培养基、胡萝卜固体培养基和黑麦固体培养基。