[发明专利]一种鱼源抗菌肽parasin I突变体及其应用

说明书

本发明提供了一种鱼源抗菌肽parasin I突变体及其应用。本发明通过分析鱼源抗菌肽parasin I的氨基酸序列，将原始19个氨基酸中2处氨基酸突变（R5K、R6Q），C末端2个丝氨酸删除，并在C端添加1个天冬酰胺，获得一种鱼源抗菌肽parasin I突变体。将鱼源抗菌肽parasin I突变体基因进行毕赤酵母偏爱密码子优化后人工合成，克隆于毕赤酵母中表达，结果重组表达的新型鱼源抗菌肽parasin I突变体与原始抗菌肽相比抗菌效力获得显著提高。将重组菌株发酵规模放大到发酵罐水平，发酵液进一步纯化后可制成抗菌肽制剂，用于水产动物疾病的预防和治疗。

技术领域

本发明属于功能基因改造技术领域，具体涉及一种新型鱼源抗菌肽parasin I突变体及其应用。

背景技术

parasin I是从受伤鲶鱼上层粘液层细胞分泌的粘液中提取的一种广谱抗菌肽，研究证明，它来源于组蛋白H₂A N末端的19个氨基酸，分子量为2kD，强力广谱抗菌（对革兰氏阴性菌和阳性菌均有抑制作用），最小抑菌浓度可达到Buforin I的4倍、magainin 2的12倍，且无溶血活性，在水产养殖业中具有良好的应用前景。

利用生物信息学方法对抗菌肽进行改造具有重要的意义，可大大提高天然抗菌肽的抑菌效果。对抗菌肽进行序列修饰包括以下方法：1、利用生物软件对天然抗菌肽进行结构、空间表位分析，通过人为增加、删除或替代1个或多个残基；2、截取肽链N端或C端部分序列；3、连接不同来源的抗菌肽片断成为杂合抗菌肽等技术手段。近20年来，这种方法已广泛应用于Cecropins、Melittins、Magainins、Temporins等抗菌肽家族的研究中。

本发明对抗菌肽parasin I关键位点氨基酸进行替换、删除等改造，获得一种新型鱼源抗菌肽parasin I突变体，有效提高了其抑菌能力，极具市场开发潜力。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型鱼源抗菌肽parasin I突变体，即通过生物软件对鱼源抗菌肽parasin I的空间结构进行分析，分别对其19个氨基酸中的2处氨基酸突变（R5K、R6Q），删除2个丝氨酸，并在C末端添加1个天冬酰胺，获得一种新型鱼源抗菌肽parasin I突变体，抗菌效力得到显著提高。

本发明首先提供一种新型鱼源抗菌肽parasin I突变体，其编码蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:1；

本发明还提供一种新型鱼源抗菌肽parasin I突变体的重组毕赤酵母的制备方法，其制备步骤如下：

1）根据新型鱼源抗菌肽parasin I突变体的氨基酸序列，选用毕赤酵母偏好密码子，合成抗菌肽基因序列，连入重组酵母表达载体中，构建成表达重组质粒；

2）将构建的表达重组质粒电转化宿主酵母菌，构建能表达鱼源抗菌肽parasin I突变体的重组基因工程酵母菌；用该重组基因工程菌高密度发酵表达出鱼源抗菌肽parasin I突变体；

3）对重组表达的鱼源抗菌肽parasin I突变体进一步浓缩、纯化后稀释分装，即为抗菌肽制剂。

本发明利用基因工程技术构建了能表达一种新型鱼源抗菌肽parasin I突变体的重组酵母菌株。将重组鱼源抗菌肽parasin I突变体制备成抗菌肽制剂，其抑菌效价高、抑菌谱广，具有广阔的市场前景和开发价值。

具体实施方式

下面结合具体实施方式来进一步描述本发明，但本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的技术方案的情况下可以对本发明的技术方案的细节和形式进行修改或替换，这些修改和替换均落入本发明保护范围内。

实施例1 鱼源抗菌肽parasin I突变体的获得