[发明专利]一种防止苹果组培褐化和不定芽诱导的方法

说明书

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种防止苹果组培褐化和不定芽诱导的方法。该组合培养基包括初代组织培养基和不定芽诱导培养基。苹果组培方法包括：选择外植体、并进行预处理，初代诱导培养，诱导形成不定芽等步骤。本申请针对现有苹果组培中褐化严重的问题，分别通过对外植体取材、外植体前处理、消毒时间、培养基成分、激素配比等多个途径进行技术方案的优化探索，最终有效防止了酚类物质氧化，较好预防了苹果褐化现象的发生，统计表明，可将褐化率降低到25%以下，解决了苹果组培褐化率高的难题，表现出较好的技术优势，也为提高苹果快速繁殖效率奠定了较好技术基础。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种防止苹果组培褐化和不定芽诱导的方法。

背景技术

苹果是我国主要栽培果树树种之一，其面积和产量均居世界首位，发展苹果产业，对增加农民收入、调整产业结构具有重要的意义。

苹果品种及类型众多，其中柱状苹果是一种特殊的矮生突变类型，其节间短、侧生分枝少，呈直立单干形，被认为是苹果超高密度栽培、集约化生产的最理想的株型。

柱状苹果中的“润太一号”品种是一种经过多年杂交选育的柱型苹果品种，由于其良好的树体特性和较高的产量在我国得到大面积推广。但种植过程中发现，润太一号苹果普遍感染多种病毒，进而严重影响苹果的品质和产量。而由于目前苹果生产中还没有能够有效防治果树病毒病的药剂，因此推广使用脱毒苗木是从源头上杜绝果树病毒病的重要措施，而高效稳定的脱毒体系是无毒苗木生产的关键。

由于组培脱毒快繁可在短时间内获得大量的优良苗木，因而是脱毒体系构建过程中常见和主要方法。但组培过程中发现，苹果在组培初代培养过程中极易发生褐变，使得初代培养成活率极低，从而限制了苹果优良组培苗的大量繁殖和生产，制约了苹果优良品种规模化、产业化的生产和推广。因此极有必要就现有组培过程中的这一缺陷进行技术攻关，以为苹果品种的推广种植奠定基础。

发明内容

本申请目的在于提供一种苹果组培用组合培养基及对应的苹果组培方法，从而缓解、克服现有苹果组培中褐化严重的缺陷问题。

本申请所采取的技术方案详述如下。

一种苹果组培用组合培养基，该组合培养基主要用于防止苹果组培褐化和不定芽诱导，包括初代组织培养基和不定芽诱导培养基，具体而言：

所述初代组织培养基配方为：MS培养基+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L+100 mg/L头孢噻肟（Cef）；或者为：MS培养基+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L+100 mg/L头孢噻肟（Cef）+5g/L PVP；

所述不定芽诱导培养基配方为：MS培养基+蔗糖30g/L +琼脂6.5g/L +3.0~4.0mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA，pH=5.6-5.8。

利用所述苹果组培用组合培养基的防止苹果组培褐化和不定芽诱导的方法，该方法主要用来培育形成脱毒苗，以柱状苹果润太一号为例，就该方法具体操作步骤介绍如下：

（1）选择外植体，并进行预处理

以柱状苹果润太一号为例，应于3-5月份在晴天15:00之前（以河南地区为例）选取无病虫害、生长健壮的当年抽生幼嫩枝条作为外植体；

所述外植体为带有腋芽的茎段，外植体规格一般为：长8~10cm、粗（直径）0.6-0.8cm左右，优选为带有1个或2个腋芽的茎段；

将外植体优选进行适当遮光处理后再剪取并进行后续清洁、灭菌处理，具体遮光处理方式为：将外植体置于外黄内黑的果袋（15×18cm）内进行遮光处理，套袋时先用手将纸袋撑开，使纸袋鼓起，然后将约10cm长当年抽生幼嫩枝条套入袋内，再将袋口收缩到枝条上，用一侧的封口丝扎住；遮光时间不超过14d，优选不超过7d；