[发明专利]用于循环肿瘤细胞可视化捕获及释放的免疫磁性纳米粒子及其制备方法

权利要求书

1.一种用于循环肿瘤细胞可视化捕获及释放的免疫磁性纳米粒子制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)制备荧光磁性纳米粒子MLNs

通过静电作用，在磁性纳米粒子Fe₃O₄上依次沉积第一高分子聚合物层、量子点层、第二高分子聚合物层和透明质酸层，得到荧光磁性纳米粒子MLNs；所述第一高分子聚合物与第二高分子聚合物相同或不同，第一高分子聚合物和第二高分子聚合物为聚丙烯酰胺或聚乙烯亚胺；所述量子点为CdSSe/ZnS量子点；

(2)制备免疫磁性纳米粒子APMNs

(21)将荧光磁性纳米粒子MLNs表面羧基进行活化，再将活化羧基后的荧光磁性纳米粒子MLNs、胱胺二盐酸盐及pH为7.5～8.5、DMF体积浓度为10％～20％的PBS缓冲液混合，并在振荡条件下于室温反应12～36h，之后对所得反应液进行磁分离并收集分离出的固体产物，再对固体产物用pH为7.3～7.4的PBS缓冲液进行洗涤得到含有二硫键的产物一；所述荧光磁性纳米粒子MLNs表面羧基总含量与胱胺二盐酸盐的摩尔比为1:1；

(22)将产物一与pH为8.0～8.5、二硫苏糖醇浓度为50～100mM的PBS缓冲液混合，并在振荡条件下于室温反应30～60分钟，之后对所得反应液进行磁分离并收集分离出的固体产物，再对固体产物用pH为7.3～7.4的PBS缓冲液进行洗涤得到产物二；所述二硫苏糖醇的用量为至少使产物一的二硫键反应完全；

(23)将产物二、3-(2-吡啶二硫基)丙酸N-羟基琥珀酸亚胺酯及pH为8.0～8.5、丙酮体积浓度为10～20％的PBS缓冲液混合，并在振荡条件下于室温反应12～24h，之后对所得反应液进行磁分离并收集分离出的固体产物，再对固体产物用pH为7.3～7.4的PBS缓冲液进行洗涤得到产物三；所述荧光磁性纳米粒子MLNs表面羧基总含量与3-(2-吡啶二硫基)丙酸N-羟基琥珀酸亚胺酯的摩尔比为1:2；

(24)将产物三表面羧基进行活化，再将羧基活化后的产物三、氨基化聚乙二醇及pH为7.5～8.5的PBS缓冲液混合，并在振荡条件下于室温反应5～24h，之后对所得反应液进行磁分离并收集分离出的固体产物，再对固体产物用pH为7.3～7.4的PBS缓冲液进行洗涤得到产物四；所述荧光磁性纳米粒子MLNs表面羧基总含量与氨基化聚乙二醇摩尔比为2:1；

(25)将产物四、抗体及pH为7.3～7.4的PBS缓冲液混合，并在振荡条件下于4～7℃反应12～24h，之后对所得反应液进行磁分离并收集分离出的固体产物，再对固体产物用pH为7.3～7.4的PBS缓冲液进行洗涤，得到免疫磁性纳米粒子APMNs；所述抗体为anti-EpCAM抗体；所述抗体与产物四质量比等于或大于1:100。