[发明专利]一种降解黄曲霉素B1的微生物处理剂及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种降解黄曲霉素B1的微生物处理剂在制备提高鸡产蛋率鸡饲料或者育肥猪饲料中的应用，其特征在于，所述降解黄曲霉素B1的微生物处理剂的添加量占鸡饲料或者猪饲料的0.10%-0.15%；

所述降解黄曲霉素B1的微生物处理剂的制备方法如下：

步骤1、制备益生菌复合物；

步骤1.1、酿酒酵母培养液的制备：按4%-8%(V/V)的接种量在酿酒酵母发酵培养基中接种酿酒酵母，在25-30℃，155-165r/min摇床培养，待培养27h时收获，调节菌的含量为1×10⁹CFU/ml；

步骤1.2、巴氏醋杆菌培养液的制备：按4%-8%(V/V)的接种量在醋酸菌发酵培养基中接种巴氏醋杆菌，在25-35℃，95-105r/min摇床培养，待培养36h时收获，调节菌的含量为1×10⁹CFU/ml；

步骤1.3、地衣芽孢杆菌培养液的制备：按3%-7%(V/V)的接种量在地衣芽孢杆菌发酵培养基中接种地衣芽孢杆菌，在32-38℃，155-165r/min摇床培养，待培养24h时收获，调节菌的含量为1×10⁹CFU/ml；

步骤1.4、将酿酒酵母培养液、巴氏醋杆菌培养液和地衣芽孢杆菌培养液以质量比为1-3：0.5-1.5：0.5-1.5的比例混合后加谷物壳粉或粗纤维粉，40-45℃温度条件下进行干燥，制备得到益生菌复合物；

步骤2、制备黄曲霉毒素B1降解酶粗酶物；

步骤2.1、将降解AFB1黑曲霉菌株涂布于PDA固体平皿，置于26-30℃恒温培养144小时至孢子大量产生时收获；在平皿中加入灭菌生理盐水，用涂布棒将平皿上的孢子刮下，用四层纱布过滤以除去菌丝残体，将孢子浓度调整为1×10⁹CFU/ml，按每瓶5ml接种于固体发酵培养基中，混合均匀后置于26-30℃恒温培养箱中培养5d后收获；按照固液比1：2的比例将固体发酵培养物与生理盐水混合均匀，室温浸泡1h；浸泡完成后先用8层纱布过滤发酵培养物，之后将滤液5000r/min条件下离心5min，再用定性滤纸过滤，最后用0.20μm的滤膜过滤除菌后保存于4℃冰箱，即为黑曲霉产降解AFB1的粗酶液；

步骤2.2、挑取降解AFB1根霉菌株，将其涂布于PDA固体平皿，置于15-35℃恒温培养96小时至孢子大量产生时收获，在平皿中加入适量灭菌生理盐水，用涂布棒将平皿上的孢子刮下，用四层纱布过滤以除去菌丝残体，将孢子浓度调整为1×10⁹CFU/ml，按每瓶5ml接种于固体发酵培养基中，混合均匀后置于15-35℃恒温培养箱中培养5d后收获；按照固液比1：2的比例将固体发酵培养物与生理盐水混合均匀，室温浸泡1h，浸泡完成后先用8层纱布过滤发酵培养物，之后将滤液5000r/min条件下离心5min，再用定性滤纸过滤，最后用0.20μm的滤膜过滤除菌后保存于4℃冰箱，即为根霉所产降解AFB1的粗酶液；

步骤2.3、将黑曲霉产降解AFB1的粗酶液和根霉所产降解AFB1的粗酶液按照体积比为1:1进行混合，制备得到黄曲霉毒素B1降解酶粗酶物；其酶活为150U/g；

步骤3、将益生菌复合物和黄曲霉毒素B1降解酶粗酶物按照体积比为1-3:1-3进行混合，制备得到降解黄曲霉素B1的微生物处理剂；

所述酿酒酵母的保藏编号为CGMCC2.3866；所述巴氏醋杆菌的保藏编号为CGMCC1.2269；所述地衣芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC1.7461；

所述降解AFB1黑曲霉菌株、降解AFB1根霉菌株由四川省食品发酵工业研究设计院提供，其中，降解AFB1黑曲霉菌株于2018年05月02日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO: M2018245；降解AFB1根霉菌株于2018年05月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO: M2018313。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，酿酒酵母发酵培养基的组成：葡萄糖20g，酵母粉10g，磷酸二氢钾1.5g，硫酸镁1g，蒸馏水1.0L，自然PH；醋酸菌培养基的组成：葡萄糖10.0g，酵母提取物10.0g，磷酸二氢钾0.5g，硫酸镁0.5g，蒸馏水1.0L，PH5.5；地衣芽孢杆菌发酵培养基的组成：蔗糖10g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水1.0L，PH6.5。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述灭菌生理盐水含有体积分数0.05%的吐温80。