[发明专利]一种构建结构开关型核酸适配体的通用方法及应用其的通用型传感器和其构建方法有效
申请号: | 201810807459.0 | 申请日: | 2018-07-21 |
公开(公告)号: | CN110734957B | 公开(公告)日: | 2023-01-31 |
发明(设计)人: | 娄新徽;黄旸 | 申请(专利权)人: | 首都师范大学 |
主分类号: | C12Q1/6806 | 分类号: | C12Q1/6806;G01N33/531;G01N33/53 |
代理公司: | 北京展翅星辰知识产权代理有限公司 11693 | 代理人: | 王文生 |
地址: | 100048 北*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 构建 结构 开关 核酸 适配体 通用 方法 应用 通用型 传感器 | ||
1.一种构建结构开关型核酸适配体的通用方法,其特征在于,包括如下步骤:设计具有结构开关性能的核酸适配体:将核酸适配体的两端分别连接富含鸟嘌呤核苷酸G的序列来构建具有结构开关性能的探针Apt-G4,所述具有结构开关性能的探针Apt-G4为A-SULF-A;A-TBA29-A;和A-T11-A;
其中,探针A-SULF-A的序列为:
AGGGACGGGACTAGAGAGGGCAACGAGTGTTTATAGAAGGGACGGGA
探针A-TBA29-A的序列为:
AGGGACGGGAAGTCCGTGGTAGGGCAGGTTGGGGTGACTAGGGACGGGA
探针A-T11-A的序列为:
AGGGACGGGATTTTTTTTTTTAGGGACGGGA。
2.一种通用型传感器的构建方法,包括:步骤(1) 设计具有结构开关性能的核酸适配体:将核酸适配体的两端分别连接富含鸟嘌呤核苷酸G的序列来构建具有结构开关性能的探针Apt-G4,所述具有结构开关性能的探针Apt-G4为A-SULF-A;A-TBA29-A;和A-T11-A;以及步骤(2) 95℃加热Apt-G4,缓冷至室温;
其中,探针A-SULF-A的序列为:
AGGGACGGGACTAGAGAGGGCAACGAGTGTTTATAGAAGGGACGGGA
探针A-TBA29-A的序列为:
AGGGACGGGAAGTCCGTGGTAGGGCAGGTTGGGGTGACTAGGGACGGGA
探针A-T11-A的序列为:
AGGGACGGGATTTTTTTTTTTAGGGACGGGA。
3.根据权利要求2所述的通用型传感器的构建方法,其特征在于,还包括步骤(3) 加入不同浓度的待测物质与Apt-G4孵育形成混合液;步骤(4) 加入氯化血红素与上述混合液孵育;步骤(5) 同时加入过氧化氢与2'-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸,测定选定时间的418nm处的紫外吸收,以紫外吸收值为纵坐标,待测物质的浓度为横坐标绘制工作曲线。
4.根据权利要求2所述的通用型传感器的构建方法,其特征在于,步骤(2)中,95℃恒温加热6分钟,然后缓冷至25℃。
5.根据权利要求3所述的通用型传感器的构建方法,其特征在于,还包括步骤(6) 选择性试验:将待测物质分别替换为等浓度的其它物质,重复步骤(1)-(5)实验。
6.根据权利要求5所述的通用型传感器的构建方法,其特征在于,所述具有结构开关性能的探针Apt-G4配置成浓度为0.375μM的溶液。
7.一种构建结构开关型核酸适配体的通用型传感器,其特征在于,该传感器包括具有结构开关性能的核酸适配体,该核酸适配体的两端分别连接富含鸟嘌呤核苷酸G的序列来构建具有结构开关性能的探针Apt-G4,所述具有结构开关性能的探针Apt-G4为A-SULF-A;A-TBA29-A;和A-T11-A;
其中,探针A-SULF-A的序列为:
AGGGACGGGACTAGAGAGGGCAACGAGTGTTTATAGAAGGGACGGGA
探针A-TBA29-A的序列为:
AGGGACGGGAAGTCCGTGGTAGGGCAGGTTGGGGTGACTAGGGACGGGA
探针A-T11-A的序列为:
AGGGACGGGATTTTTTTTTTTAGGGACGGGA。
8.根据权利要求7所述的传感器,其特征在于,所述具有结构开关性能的探针Apt-G4配置成浓度为0.375μM的溶液。
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