[发明专利]一种生产埃博霉素的方法

说明书

本发明公开了一种生产埃博霉素的方法，将埃博霉素生产菌经过平板培养、种子培养后，接种到发酵培养基中发酵生产埃博霉素，在发酵培养基中添加纤维素、半胱氨酸和埃博霉素特异性靶向吸附聚合物，解除发酵过程累积埃博霉素而产生的反馈抑制作用，提高埃博霉素的产量，所述发酵培养基中纤维素的添加量为0.1‑2.0g/L，半胱氨酸在发酵48h后加入，半胱氨酸的加入量为0.01‑0.5g/L，所述埃博霉素特异性靶向吸附聚合物为分子印迹聚合物。通过对埃博霉素发酵条件的优化，使得菌株加大埃博霉素的产量，对于大规模，低成本生产埃博霉素提供了很大的参考价值和社会意义。

技术领域

本发明涉及微生物发酵技术领域，具体涉及一种生产埃博霉素的方法。

背景技术

埃博霉素(epothilone)是一类大环内酯类化合物，由德国国家生物技术中心(GBF)的G. Höfle等人于1993年首次报道。从粘细菌亚目的纤维堆囊菌菌株发酵液中可以分离埃博霉素，其主要组分为Epothilone A和B。埃博霉素Ａ、Ｂ和Ｄ对癌细胞的生物活性与紫杉醇相当，甚至更强，尤其是埃博霉素Ｂ，其活性比紫杉醇强10-100倍．在Ｃ12位上的有甲基取代，以及Ｃ12-Ｃ13双键换成环氧基团后，埃博霉素的活性将极大提高。埃博霉素具有比紫杉醇优越的抗肿瘤特性：①埃博霉素比紫杉醇水溶性好，结构简单，有利于化学合成埃博霉素及结构衍生化。②埃博霉素没有紫杉醇细胞内毒素活性。 ③与紫杉醇不同，埃博霉素在P糖蛋白表达型的多药耐药性细胞中也维持很大的细胞毒性。

埃博霉素对细胞有强烈的细胞毒活性，其中埃搏霉素B的作用效果更强，能够诱导微管蛋白在低浓度和GTP（三磷酸鸟苷酸）及微管蛋白不存在的条件下聚合形成微管，抑制癌细胞的分裂，从而导致癌细胞的死亡。作用机制和紫杉醇相似：结合在微管上的紫杉醇的结合位点，通过增加原丝间的作用强度而增加微管的稳定性，使细胞的纺锤体不能形成。埃博霉素是H紫杉醇与微管蛋白多聚体结合的竞争的抑制剂。

埃博霉素作为极其有潜力的抗癌新药，引起了全世界的化学家、生物学家及药学家的极大兴趣和研究热情。从1993年发现至今十多年时间，有关埃博霉素的研究报告达500多篇，天然的埃博霉素Ａ和Ｂ已经进入了临床Ⅱ期试验，化学合成的埃博霉索Ｂ内酰胺已经进入了临床Ⅲ期试验。埃博霉素D，埃博霉素B及埃博霉素B的半合成类似物MBS-247550，均己进入临床研究阶段，有望成为新型的抗肿瘤药物。

生产埃博霉素的的方法有化学合成法和生物合成法。由于化学合成杂质多，效率低，所以现今主要应用的方法是生物合成法。生物合成法主要是通过粘细菌发酵产生埃博霉素。发酵法产生的主要是埃博霉素A和B，目前国际上通过粘细菌发酵合成埃博霉素的产量较低，美国施贵宝达到228mg/L（A:B=1:6），国内李越中等人通过研究改良能达到180mg/L（A:B=2），但是这个产量并不能达到现在实际需求，所以在发酵产埃博霉素方面还有很大的空间前进。

发明内容

本发明的目的是在对埃博霉素高产菌发酵产埃博霉素过程中存在的一些瑕疵进行优化改良，以达到成本低产率大的一种高效产埃博霉素的方法。

为了达到上述目的，本发明采用的技术手段如下：

一种生产埃博霉素的方法，将埃博霉素生产菌经过平板培养、种子培养后，接种到发酵培养基中发酵生产埃博霉素，在发酵培养基中添加纤维素、半胱氨酸和埃博霉素特异性靶向吸附聚合物，解除发酵过程累积埃博霉素而产生的反馈抑制作用，提高埃博霉素的产量。

所述发酵培养基中纤维素的添加量为0.1-2g/L。

所述半胱氨酸在发酵48h后加入，半胱氨酸的加入量为0.01-0.5g/L。