[发明专利]一种改良型结核分枝杆菌快速抗酸荧光染色试剂

说明书

本发明公开了一种改良型结核分枝杆菌快速抗酸荧光染色试剂，包含两种试剂，A液包含纯水，氯化钠或氯化钾，二甲基亚砜，甘油，金胺O。B液包括纯水、盐酸，乙醇，甲基绿或伊文思蓝。本发明产品通过优化配方，对金胺O荧光染色法进行改良优化，研发出一种双剂型的结核分枝杆菌快速抗酸荧光染色试剂。只需两步操作即可完成染色，且染色时间由传统的20分钟缩减到2分钟左右，临床使用更加方便、快捷，大大提高结核分枝杆菌的检测效率。

技术领域

本发明属于生物医学诊断技术领域，具体涉及一种改良型结核分枝杆菌快速抗酸荧光染色试剂。

背景技术

肺结核是一种常见的呼吸系统传染性疾病，传播速度很快，若未能及时接受有效诊断及治疗，很容易引发结核杆菌感染其他脏器或系统，比如骨结核、肠道结核、肾脏结核，不仅带给患者较大痛苦，还能提高治疗难度，加速病情进展，延长治疗时间，增加脏器功能衰竭风险。随着我国医疗水平的不断深入发展，对肺结核防控力度的逐步加强，加上民众对于医疗卫生要求的逐渐提高，综合作用之下，很多结核患者获得了及时有效的治疗。但据医学调查显示，肺结核患者发病率仍然居高不下，现已成为全世界突出的公共卫生问题。

结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，大小1～0.4μm。牛分枝杆菌则比较粗短。分枝杆菌属的细菌细胞壁脂质含量较高，约占干重的60%，特别是有大量分枝菌酸包围在肽聚糖层的外面，可影响染料的穿入。结核分枝杆菌在体内外经青霉素、环丝氨酸或溶菌酶诱导可影响细胞壁中肽聚糖的合成，异烟肼影响分枝菌酸的合成，巨噬细胞吞噬结核分枝杆菌后溶菌酶的作用可破坏肽聚糖，均可导致其变为L型，呈颗粒状或丝状。

临床常见的用于结合杆菌检测的方法包括齐-尼氏抗酸染色法、培养法和金胺O荧光染色法等。

1.齐-尼氏抗酸染色法：抗酸染色法是一种常用、简便而迅速的结合杆菌检测方法,对结核病的诊断具有重要意义。该方法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。该法受制于痰液中分支杆菌数量，敏感性低，漏检率高。且该方法无法区分死活菌，尤其是无法区分结核分支杆菌和非结核分支杆菌。

2.分离培养方法：专性需氧。最适温度为37℃，低于30℃不生长。结核分枝杆菌细胞壁的脂质含量较高，影响营养物质的吸收，故生长缓慢。在一般培养基中每分裂1代需时18～24小时。常用的有罗氏固体培养基，内含蛋黄、甘油、马铃薯、无机盐等。蛋黄含脂质生长因子，能刺激生长。根据接种菌多少，一般2～4周可见菌落生长。菌落呈颗粒、结节或花菜状，乳白色或米黄色，不透明。培养法虽然灵敏度高但检测周期太长，不但贻误治疗，也大大增加了管着传播给别人的风险。

3.金胺O荧光染色法：通过金胺O染色及复染后，用含有紫外光源的荧光显微镜检查，抗酸杆菌呈亮黄色，而其他细菌及背景中的物质呈暗黄色，这种方法可用低倍镜检，因此能更快速找出分枝杆菌。该方法有三种试剂，三步法操作。第一步金胺O染色15分钟，冲洗完第二步酸洗2分钟，冲洗完第三步复染2分钟。整个染色过程大概需要20分钟。

发明内容

本发明针对现有技术不足，对金胺O荧光染色法进行改良优化，研发出一种双剂型的结核分枝杆菌快速抗酸荧光染色试剂。本发明产品稳定性好，两种试剂，只需两步操作即可完成染色，且染色时间由传统的20分钟缩减到2分钟左右，临床使用更加方便、快捷，大大提高结核分枝杆菌的检测效率。

本发明具体技术方案如下：

一种改良型结核分枝杆菌快速抗酸荧光染色试剂，其特征在于包括两种试剂A液和B液。A液包含水，盐，促溶剂，保湿剂，荧光素。B液包含水，酸，醇，复染剂。

本发明A液所述盐为无机盐，优选氯化钾或氯化钠。优选碱的浓度为0.5%-1.0%（W/V），更优选0.9%（W/V）。