[发明专利]一种利用基因芯片检测α-倒捻子素引发的基因表达变化的方法

权利要求书

1.一种采用基因芯片技术检测IEC-6细胞基因表达谱的变化的方法，所述方法包括以下步骤：

步骤一，IEC-6细胞炎症模型的建立，方法如下：

1)，IEC-6细胞培养；

2)，脂多糖刺激建立IEC-6细胞炎症模型；

3)，分离提取LPS刺激后的IEC-6细胞总RNA；

4)，总RNA反转录成cDNA，再转化为cRNA，纯化cRNA；

5)，用基因芯片检测脂多糖刺激后的IEC-6细胞基因变化

cRNA样品和芯片杂交，然后取出芯片，洗涤后在扫描仪中扫描；根据结果判断加入脂多糖的样品和不加脂多糖的样品之间的表达变化；

步骤二、用脂多糖刺激后的IEC-6细胞炎症模型测试中药，方法如下：

1)，IEC-6细胞的培养，分离，纯化；

2)，脂多糖刺激IEC-6细胞；

3)，加入中药；

4)，提取加入中药的脂多糖刺激后的IEC-6细胞的总RNA；

5)，总RNA反转录成cDNA，再转化为cRNA，纯化cRNA；

6)，基因芯片检测IEC-6细胞炎症细胞基因变化

cRNA样品和芯片杂交，然后取出芯片，洗涤后在扫描仪中扫描；

7)，根据检测结果判断加入中药的的样品和不加中药的样品之间的表达变化。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述中药为α-倒捻子素。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤二、用LPS刺激后的IEC-6细胞炎症模型测试中药，方法如下：

1)，IEC-6细胞培养

培养IEC-6细胞，当IEC-6细胞融合率达90％以上时，行细胞传代；

2)，建立IEC-6细胞炎症模型

加入脂多糖刺激IEC-6细胞，得到炎症模型；

3)，向脂多糖刺激后IEC-6细胞中加入α-倒捻子素

向脂多糖刺激后IEC-6细胞中加入α-倒捻子素；

4)，对加入α-倒捻子素的细胞提取总RNA

加入试剂，使细胞完全裂解，经离心得到RNA；

5)，cRNA样品的制备

纯化总RNA，合成cDNA，将cDNA转化为aaUTP标记的cRNA，纯化cRNA；

6)，检测

cRNA样品和芯片杂交，然后取出芯片，洗涤后在扫描仪中扫描；

7)，根据检测结果判断加入α-倒捻子素的样品和不加α-倒捻子素的样品之间的表达变化。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，其中，所述1)，IEC-6细胞培养，步骤如下：

细胞培养瓶中培养IEC-6细胞，当IEC-6细胞融合率达90％以上时，用0.25％含EDTA胰酶进行消化处理，随后加入含酚红DMEM完全培养液终止胰酶消化作用，将含细胞培养液移至15mL离心管中，1000rpm离心5min，弃去培养基，加入含酚红DMEM完全培养液，进行细胞传代。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，其中，所述2)，建立IEC-6细胞炎症模型，步骤如下：

用5-15μg/ml的脂多糖刺激IEC-6细胞12-36小时作为炎症模型。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，其中，所述3)，向脂多糖刺激后IEC-6细胞中加入或不加α-倒捻子素，步骤如下：

分别取低、中、高三种浓度α-倒捻子素，加入刺激后的细胞悬液中5-10小时。