[发明专利]一种具有抗氧化功效的合成多肽及编码该多肽的基因与其制备方法和应用

说明书

本发明公开一种具有抗氧化功效的合成多肽及编码该多肽的基因与其制备方法和应用。本发明采用Fmoc固相合成方法，采用固相合成树脂为载体，从多肽的C端到N端在混合偶联剂作用下，按照氨基酸序列的排列方式，逐一地将氨基酸与固相合成树脂偶联，合成含有目标多肽片段的树脂，进而通过裂解脱除剂作用下，使得外层树脂裂解并脱去侧链的Fmoc保护基，目标多肽从固相载体中被切下来，经分离纯化后可得到具有抗氧化功效的多肽。本发明的合成方法操作简单，合成时间短，副产物少，且合成成本较低。本发明合成多肽具有显著的体外抗氧化活性，效果良好，可用于制备具有抗氧化和缓解衰老相关的保健食品及药品领域，安全性高且应用广泛，具有很好的市场前景。

技术领域

本发明属于多肽技术领域，具体涉及一种具有抗氧化功效的合成多肽及编码该多肽的基因与其制备方法和应用。

背景技术

多肽是由氨基酸通过酰胺键连接形成，在生物体内可作为神经递质、激素等信号因子，通过与受体相互作用进行信息传导和信息交流。多肽对靶分子具有特异性识别的特征，以多肽为分子探针识别的靶向药物运输体系被广泛应用于医药及材料领域。体外合成多肽是深入研究其功能、生物化学性质及应用的重要方法。相比生物制备方法，化学合成法制备周期短，且能实现自动化生产。

目前，多肽的固相合成(SPPS)已成为多肽制备的主要方法之一，不仅可以合成天然氨基酸多肽，还能根据需求合成非天然氨基酸的多肽，大大增加了合成多肽的种类和性质。由于不同氨基酸之间的侧链基团结构不同，其化学性质也具有较大的差异，从而使链长的多肽在固相载体树脂偶联时效率低。此外，氨基酸残基的消旋及特殊位点的修饰等副反应，导致最终合成多肽纯度较低。因此，进一步提高多肽合成效率及纯度是目前面临的主要问题。

多肽固相合成方法可以分为两大类：Boc固相合成法和Fmoc固相合成法，两种方法合成原理基本一致，但采用的保护基不同，后续偶联剂、脱除剂及反应条件也有很大的差异。B Merrrifield在合成血管舒缓激肽时，采用Boc作为氨基酸的保护基，是经典的多肽固相合成法。近年来，有大量的研究表明Boc法的使用效率低，反应不完全，同时出现很多副反应产物的积累，因此Boc逐渐被Fmoc所取代。Fmoc固相合成法是使用Fmoc保护氨基酸的氨基，Fmoc对酸稳定，可采用碱性化合物作为脱保护剂。相比Boc固相合成方法反应，Fmoc法具有条件温和、副反应少、产物周期短、成本低等优势。在固相合成过程中，除氨基酸氨基端的保护基外，载体树脂的结构和性能对氨基酸偶联及多肽链的延长产生很大的影响，从而影响目标多肽的生产效率和纯度。因此，寻求更有效的载体树脂、裂解基及脱除保护剂是进一步优化Fmoc固相合成法，提高其产物效率和纯度的有效方法。

氧化反应不仅影响食品的质量而且危害人体健康，因此抗氧化剂在国内外发展很快，不仅用于脂肪类食品的抗氧化，并且可作为功能因子添加入保健品、药品及化妆品中应用。人体在正常生理代谢过程中会产生自由基，这些自由基在人体抗氧化酶作用下可维持在一定水平。当人体处于病理状态或进入老年阶段时，自由基由于不能被即时处理而堆积在细胞内，进而与机体内大分子物质反应产生过氧化物，导致细胞吸收代谢及能量代谢异常。人体内氧化产生的自由基与人的衰老和许多疾病有关，食品工业中常用的抗氧化剂BHA、BHT具有很好的清除自由基作用，但其本身具有毒副作用。从食物中鉴定并合成的抗氧化活性肽，具有良好的生物相容性、且毒副作用小，相对氨基酸和蛋白质更容易被人体吸收利用。Wang等用麦麸蛋白经木瓜蛋白酶水解所得生物活性肽，具有较强的自由基清除能力。沈蓓英将大豆分离蛋白经酸水解后，制备得到分子量在700Da的多肽，对自由基具有很好的清除作用。研究表明，骨骼肌中的肌肽、金枪鱼酶解后多肽等具备显著的抗氧化活性。抗氧化活性肽具有生物活性高、毒性小等特定，近年来已有部分科研工作者奠定研究基础，揭示多肽作为保健食品、化妆品及药物的潜力。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的目的在于提供了一种具有抗氧化功效的合成多肽及编码该多肽的基因与其制备方法和应用，本发明的合成多肽具有清除自由基能力。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现。