[发明专利]一种利用黑曲霉分离提取5-硝基间苯二甲酸二甲酯的方法

说明书

本发明公开了一种利用黑曲霉分离提取5‑硝基间苯二甲酸二甲酯的方法，是将黑曲霉的孢子粉用丙酮提取制得黑曲霉提取液，并将黑曲霉提取液浓缩后制得浸膏，将浸膏层析后即可制得5‑硝基间苯二甲酸二甲酯；所述的黑曲霉是黑曲霉xj，保藏号为：CCTCC NO：M 206021，名称为：黑曲霉xj(Aspergillus niger xj)。本发明制备5‑硝基间苯二甲酸二甲酯属于一种生物来源，其具有底物廉价易得，提取工艺简单、易行，生产过程环保、溶剂残留少、污染低、培养基质容易获得的特点。

技术领域

本发明涉及一种提取5-硝基间苯二甲酸二甲酯的方法，特别是一种利用黑曲霉分离提取5-硝基间苯二甲酸二甲酯的方法。

背景技术

黑曲霉(Aspergillus niger)属于真菌中的一个常见种，能够在较宽的温度和pH范围及较低的湿度下生存，广泛分布于世界各地的粮食、植物性产品和土壤中。黑曲霉作为美国食品药品监督管理局(U.S.FDA)认证的一般公认安全(GRAS)菌种，广泛应用于工业生产有机酸、酶类，具有巨大的市场潜在价值。黑曲霉产柠檬酸、葡糖酸、没食子酸、草酸等，产酶方面主要是淀粉酶、过氧化氢酶、纤维素酶、果胶酶、酸性蛋白酶。不仅如此，黑曲霉的众多代谢产物都具有多种重要应用价值。

5-硝基间苯二甲酸二甲酯，又称5-硝基异酞酸二甲酯，分子式为C₁₀H₇NO₆，英文名称为Dimethyl5-nitroisophthalate(DM-NIP)。5-硝基间苯二甲酸二甲酯是一种精细化工中间体，主要用于医药、胶片、纤维、皮革等行业，也可用作医用X-胶片的显影剂、补色抑制剂等。

5-硝基间苯二甲酸二甲酯具有水溶性大、粘度小、渗透压低等优点，可用来合成诊断用药碘酞酰胺，用于心血管、腹主动脉、肾盂、脑血管等造影，也可以用来合成非离子型X-CT造影剂碘海醇。关于5-硝基间苯二甲酸二甲酯的制备很早就有文献报道，目前工业制备主要由5-硝基间苯二甲酸(5-Nitro-iso-phthalate,NIP)与甲醇在H₂SO₄存在下酯化而得，尚无生物来源报道。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种利用黑曲霉分离提取5-硝基间苯二甲酸二甲酯的方法。本发明制备5-硝基间苯二甲酸二甲酯属于一种生物来源，其具有底物廉价易得，提取工艺简单、易行，生产过程环保、溶剂残留少、污染低、培养基质容易获得的特点。

本发明的技术方案：一种利用黑曲霉分离提取5-硝基间苯二甲酸二甲酯的方法，是将黑曲霉的孢子粉用丙酮提取制得黑曲霉提取液，并将黑曲霉提取液浓缩后制得浸膏，将浸膏层析后即可制得5-硝基间苯二甲酸二甲酯；所述的黑曲霉是黑曲霉xj，保藏号为：CCTCC NO：M 206021，名称为：黑曲霉xj(Aspergillus niger xj)，(保藏地址：中国武汉武汉大学)。

前述的利用黑曲霉分离提取5-硝基间苯二甲酸二甲酯的方法，所述方法具体步骤如下：

1)浸膏的制备：将黑曲霉孢子粉用丙酮提取得黑曲霉提取液，并将该提取液浓缩，得浸膏；

2)硅胶柱层析：用石油醚湿法装柱得到硅胶层析柱，将步骤(1)中的浸膏用丙酮溶剂溶解并与硅胶拌样，挥干溶剂后干法上样；用石油醚：丙酮梯度洗脱，分段收集洗脱液，薄层层析跟踪检测，合并相同组分，浓缩；

3)反向柱层析：选取步骤(2)中极性适中浓缩组分用丙酮溶剂溶解与硅胶拌样，挥干溶剂后湿法上反向硅胶柱，并用纯净水：丙酮梯度洗脱，分段收集洗脱液，薄层层析跟踪检测，合并相同组分，浓缩；

4)Sephadex LH-20凝胶柱层析：将步骤(3)中成点性较好的浓缩组分用氯仿：甲醇重量比为1:1的溶剂溶解，上氯仿：甲醇重量比为1:1的凝胶柱，用氯仿：甲醇洗脱，收集洗脱液，薄层层析跟踪检测，合并相同组分，浓缩得目标粗品；