[发明专利]一种基于化学反应简化的O-GalNAc糖基化肽段鉴定方法

权利要求书

1.一种基于化学反应简化的O-GalNAc糖基化肽段鉴定方法，其特征在于：

并利用有机酸去除O-GalNAc糖肽中的唾液酸，然后进行质谱检测，最后通过数据库检索进行O-GalNAc糖肽的分析。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：是一种酸辅助糖型简化的O糖基化肽段鉴定方法，首先对复杂的O-GalNAc糖肽进行富集，并利用有机酸去除富集的O-GalNAc糖肽中的唾液酸，有效降低糖肽结构的复杂程度，并提高糖肽在质谱中的检测灵敏度和碎裂效率，最后通过数据库直接检索进行O-GalNAc糖肽的分析。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

利用有机酸去除富集的O-GalNAc糖肽中的唾液酸是：利用化学反应释放糖肽末端的唾液酸结构，有效降低糖链结构的复杂程度，简化O-GalNAc糖基化肽段的结构和异质性，提高糖肽的检测灵敏度。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

质谱检测过程为：针对去唾液酸化的简化O-GalNAc糖肽结构进行质谱碎裂，唾液酸的去除有助于提高O-GalNAc糖肽的离子化效率，并降低糖肽二级谱中性丢失的概率，提高肽段骨架序列的碎裂效率；

针对去唾液酸化O-GalNAc糖肽结构简化的谱图，其候选检索糖型结构数目减少，显著降低检索空间和随机匹配的错误率，提高O-GalNAc糖肽的鉴定效率。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

利用有机酸去除O-GalNAc糖肽中的唾液酸是：基于唾液酸糖苷键在酸性条件不稳定的特性，发展基于有机酸-加热条件水解其糖苷键，实现O-GalNAc末端唾液酸的高效释放，进而实现酸辅助的糖型简化策略。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：

O-GalNAc糖肽结构碎裂：去唾液酸化的简化O-GalNAc糖肽结构进行质谱碎裂，针对糖肽易发生中性丢失，肽段骨架序列碎裂效率低的问题，发展基于高-低能量结合的模式，实现O-GalNAc糖肽的肽段骨架和糖链结构的同时碎裂。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：

O-GalNAc糖肽数据检测去：唾液酸化O-GalNAc糖肽结构简化的谱图，其候选检索糖型结构数目减少，其搜库检索空间和随机匹配的错误率显著降低，发展O-GalNAc直接搜库检索策略，其可变修饰包O糖基化修饰包括丝氨酸(Ser)和苏氨酸(Thr)上分别增加+365.1322Da(Gal-GalNAc)或+203.0875Da(GalNAc)或+730.2644Da(Gal-(Gal-GlcNAc-)GalNAc)等，并设定相应的中性丢失，提高O-GalNAc糖肽的鉴定效率。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：有机酸-加热条件水解中的有机酸为三氟乙酸，其于反应体系中的体积分数为1％(v/v)；加热反应的温度为75℃，反应时间为60分钟。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述O-GalNAc糖肽是于人血清样品中富集的O-GalNAc糖肽。

10.根据权利要求1-9任一所述的方法，其特征在于：

该策略的研究对象是组织或/细胞中内源性的O-GalNAc糖基化分析，其采用的化学反应试剂均为常用试剂，反应条件温和，副反应效率低，能够显著降低O-GalNAc糖基化的糖型复杂程度，并提高糖肽的检测灵敏度，可用于多种生物样本的O连接糖基化蛋白质组分析。