[发明专利]人副流感I型病毒大规模培养的方法

说明书

本发明公开了一种人副流感I型病毒大规模培养的方法，首先将人副流感I型病毒按0.001~0.01MOI接种于长满单层的Vero细胞上，然后于37℃、5%CO₂培养；每天采用ELISA法检测上清中病毒效价，绘制病毒增殖曲线；至第7天，收取病毒培养上清，使用胰酶消化液消化细胞，按1:4‑5进行带毒细胞的传代扩增，然后于37℃、5%CO₂培养；重复收取病毒液，重新添加病毒培养液，或重复进行带毒细胞的传代扩增至所需规模。本发明在第7天进行带毒细胞的传代扩增，此时病毒效价高，细胞活率较好，减少了细胞制备量，缩短了培养时间，提高了工作效率；同时本发明按1:4‑5进行带毒细胞的传代扩增，无需重新接毒，可根据需要扩大规模，满足了对人副流感I型病毒疫苗进行深入研究和制造的需求。

技术领域

本发明涉及病毒的培养方法，尤其是涉及一种人副流感I型病毒大规模培养的方法。

背景技术

人类副流感病毒(HPIVs)是引起儿童下呼吸道感染的一种病毒，其致病性仅次于呼吸道合胞病毒 (RSV)。与RSV一样，人类副流感病毒可以造成反复发作的上呼吸道感染（如感冒和喉咙痛），同时它也能造成严重的反复感染的下呼吸道疾病（如肺炎，支气管炎和细支气管炎），特别是在老年人和有免疫缺陷人群中，其发病率更高。

人类副流感I型病毒是单链的RNA病毒。病毒表面含有溶合酶和红血球凝聚素—神经氨酸苷酶的醣蛋白刺。从血清学上人类副流感病毒可分为I型、Ⅱ型、Ⅲ型、IV型，其中IV型又分a和b两个亚型。这些病毒颗粒大小不一（平均直径大小在150纳米～300纳米之间），形态各异。

目前为止，对于人类副流感I型病毒引起的呼吸道感染还没有特效药物，也没有制造出疫苗。而制造疫苗，就需要大规模培养人类副流感I型病毒。传统的培养方法是：细胞经逐级传代扩增，得到病毒接种后，经10~14天培养，然后再进行单批次收获。因人类副流感I型病毒病变不明显，产毒慢，培养周期长，成本高，严重影响了对人类副流感I型病毒疫苗的进一步研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种操作简单，能对人副流感I型病毒进行大规模培养的方法，以满足对人副流感I型病毒疫苗的研究和制造需求。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的人副流感I型病毒大规模培养的方法包括下述步骤：

第一步,将人副流感I型病毒按0.001~0.01MOI接种于长满单层的Vero细胞上，然后于37℃、5%CO₂培养；

第二步，接种后，每天采用ELISA法检测上清中病毒效价，绘制病毒增殖曲线；

第三步，培养至第7天，收取病毒培养上清，使用胰酶消化液消化细胞，按1:4-5进行带毒细胞的传代扩增，然后于37℃、5%CO₂培养；

第四步，重复第二步收取病毒液，重新添加病毒培养液，或重复第三步进行带毒细胞的传代扩增至所需规模。

本发明的优点在于在病毒培养第7天进行带毒细胞的传代扩增，此时病毒效价较高，细胞活率也较好，较传统单批次收获，减少了细胞制备量，缩短了培养时间，提高了工作效率；同时本发明按1:4-5进行带毒细胞的传代扩增，无需重新接毒，可根据需要扩大规模，满足了对人副流感I型病毒疫苗进行深入研究和制造的需求。

具体实施方式

下面通过具体实例，对本发明方法作更加详细的说明,以便于本领域技术人员对本申请的理解。

本发明所述的人副流感I型病毒大规模培养的方法包括下述步骤：：