[发明专利]一种前列腺癌原位PDX模型构建方法

权利要求书

1.一种前列腺癌原位PDX模型构建方法，其特征在于包括以下步骤：

1）肿瘤样本采集：将手术中切取肿瘤边缘生长比较旺盛、无溃疡坏死的肿瘤组织，迅速装入含有组织保存液的离心管中，离心管装入冰包低温运输至实验室；

2）肿瘤样本处理：在实验室生物安全柜内用0.4%的台盼蓝染液检测肿瘤组织活性，剔除没有活性的组织；然后将组织放入0.2%的碘伏溶液中浸泡30秒钟消毒，再用含有3%双抗的PBS溶液冲洗组织；将冲洗干净的肿瘤组织放入新的培养皿中，一边用 7号针头戳组织，一边用少量 PBS溶液冲洗，把组织戳成片状后，再用两把镊子拧、挤压组织，并在 PBS溶液中漂洗，然后收集液体，通过 300 目过滤网过滤；将过滤后的微组织块悬液收集进15ml离心管，1000转/分钟离心5分钟，弃去离心管内大部分的液体，留取少量培养基悬浮微组织块备用；

3）小鼠接种：在SPF级动物房，选择成年雄性裸鼠或其他高度免疫缺陷雄性小鼠，麻醉后将小鼠仰卧位固定于手术板上，有毛小鼠需要将下腹部毛发剃除干净，暴露前列腺腹侧叶隆起的位置，0.5%碘伏消毒局部皮肤后，用眼科剪在下腹部做一个约5mm长的切口，然后用眼科剪提起切口边缘皮肤，暴露前列腺腹侧叶；用100ul微量注射器吸取20-50μl混匀的微小组织块混悬液或者细胞悬液多点注射进前列腺腺腹侧叶内，然后缝合切口，0.5%碘伏棉签消毒缝合部位，接种完毕；

4）小鼠饲养与观察：将小鼠常规饲养在SPF级动物房IVC笼具中，每周观察两次荷瘤小鼠，用手感触前列腺质地，并用游标卡尺测量肿瘤大小，记录肿瘤生长曲线；

5）病理和基因检测：当肿瘤体积达到1500mm³或者表面有溃疡时，将瘤体手术剥离下来，取一部分进行病理检测和基因测序，剩余组织一部分放入冻存液中冻存，一部分继续传代。

2.根据权利要求1所述的前列腺癌原位PDX模型构建方法，其特征在于：在步骤1）中，还需要对组织块的分块处理，具体操作方法是：在实验室生物安全柜内用0.4%的台盼蓝染液检测肿瘤组织活性，剔除没有活性的组织；然后将组织放入0.2%的碘伏溶液中浸泡30秒钟消毒，再用含有3%双抗的PBS溶液冲洗组织；将冲洗干净的肿瘤组织放入新的培养皿中，一边用 7号针头戳组织，一边用少量 PBS溶液冲洗，把组织戳成片状后，再用两把镊子拧、挤压组织，并在 PBS溶液中漂洗，然后收集液体，通过 300 目过滤网过滤；将过滤后的微组织块悬液收集进15ml离心管，1000转/分钟离心5分钟，弃去离心管内大部分的液体，留取少量培养基悬浮微组织块备用。

3.根据权利要求1所述的前列腺癌原位PDX模型构建方法，其特征在于：在步骤3）中，给小鼠接种时，将小鼠仰卧位固定于手术板上，有毛小鼠需要将下腹部毛发剃除干净，暴露前列腺腹侧叶隆起的位置；0.5%碘伏消毒局部皮肤后，用眼科剪在下腹部做一个约5mm长的切口，然后用眼科剪提起切口边缘皮肤，暴露前列腺腹侧叶；用100ul微量注射器吸取20-50μl混匀的微小组织块混悬液或者细胞悬液多点注射进前列腺腺腹侧叶内，然后缝合切口，0.5%碘伏棉签消毒缝合部位，接种完毕；操作熟练后可以直接进皮肤穿刺接种前列腺癌微组织块或者原代细胞悬液，而不需要切开皮肤。