[发明专利]一种用于雏鸽快速雌雄鉴别的引物对、试剂盒及快速雌雄鉴别方法

说明书

本发明公开了一种用于雏鸽快速雌雄鉴别的引物对，包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明的有益效果是(1)避免了鸽翻肛、静脉采血或拔取羽毛，对鸽的应激大大下降；(2)可避免进行血液裂解或核苷酸的抽提，直接进行PCR；(3)引物设计在CHD保守区域，特异性高，PCR扩增效果好，扩增条带清晰，结果易判读。本发明还公开了一种试剂盒及快速雌雄鉴别方法。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，特别涉及一种用于雏鸽快速雌雄鉴别的引物对、试剂盒及雏鸽快速雌雄鉴别方法。

背景技术

鸽的繁殖方式是典型的一夫一妻制，鸽的雌雄鉴别是鸽生产、繁殖工作中不可缺少的一环。如果雌雄比例不当，雄雄配对会出现鸽打斗、舍内不安定，雌雌配对则出现产蛋率下降、未受精蛋比例升高，均能影响种鸽生产成绩。

由于鸽属于晚熟鸟类，在性成熟前较难区分性别，目前种场人员在种鸽140天龄后从鸽子的肛门、体型、行为及羽毛特征等方面进行鉴别，初步确定性别后进行配对，后期将根据配对鸽是否打斗、产蛋数量等评价配对结果，对于配对错误的鸽子，需后续进行校正。

中国申请专利201010281972.4公开了一种可以鉴定禽类性别的PCR方法，该方法需拔取羽毛，将羽毛根部进行核酸抽提后进行PCR，根据PCR产物条带数量可以准确鉴别鸽、鹦鹉和鹌鹑的性别。

中国申请专利201510799225.2公开了一种鉴定鸽子性别的PCR方法，该方法实用性较强，不需要对鸽血进行核酸抽提，直接用鸽血为模板进行PCR，根据PCR扩增结果即可判断鸽的性别。

但是现有的常规鸽雌雄鉴别方法存在以下缺点：

(1)错配率高，经验丰富的饲养员雌雄鸽配对准确率为80％，而对于新手准确率仅为50％，后期需要投入大量时间进行配对校正，严重影响种鸽的生产效率；

(2)配种前期雌雄鸽混合饲养周期长，鸽只死淘率较高：鸽属于晚熟鸟类，前期雌雄鸽混合饲养时间较长，青年鸽舍常出现鸽只打斗，导致鸽群应激、舍内粉尘较大，青年鸽死淘比例较大；

(3)高比例公鸽长期饲养，导致种场饲养成本较高：鸽在正常情况下，公：母＝6:4，因此有1/3多余公鸽会饲养至雌雄鉴别完成后才淘汰，多余公鸽提高了种鸽场饲养成本；

而专利201010281972.4鸽、鹦鹉和鹌鹑雌雄鉴别方法需要拔取羽毛，将羽毛根部进行核酸抽提后(PPCR模板处理不同)才能进行PCR，导致样品前处理复杂，无法在鸽场大规模推广使用。

而且专利201510799225.2的雌雄鉴别方法需要从鸽翅静脉采集血液，对鸽的应激较大，如果对创口处理不当，则易造成感染，同时该方法应用成本较高，导致种鸽场雌雄鉴别成本较大。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种用于雏鸽快速雌雄鉴别的引物对，另一个目的是提供一种试剂盒。本发明的又一个目的是提供一种雏鸽快速雌雄鉴别的方法。

根据本发明的一个方面，提供了一种用于雏鸽快速雌雄鉴别的引物对，包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

根据本发明的另一个方面，提供了上述用于雏鸽快速雌雄鉴别的引物对在制备鉴定鸽子性别的试剂盒中的用途。

根据本发明的另一个方面，提供了一种试剂盒，试剂盒中含有权利要求1的用于雏鸽快速雌雄鉴别的引物对。

在一些实施方式中，试剂盒还包括Bio-ready Taq mix、EP管和高压灭菌ddH2O。

根据本发明的另一个方面，提供了一种雏鸽快速雌雄鉴别的方法，包括以下步骤：