[发明专利]一种宽吸收光谱重组光合蛋白分子及其构建方法

权利要求书

1.一种宽吸收光谱重组光合蛋白分子，其特征在于，由叶绿素结合蛋白与全色基藻胆蛋白的融合蛋白以及叶绿素a在体外进行结合得到；

所述融合蛋白为藻蓝蛋白α亚基cpcA基因与叶绿素结合蛋白LhcⅡ基因经重叠PCR融合后所构建表达的蛋白分子。

2.一种宽吸收光谱重组光合蛋白分子的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)分别以pUC19-LhcⅡ为模板，LHCⅡ-F和LHCⅡ-PCA-R为引物；以pCDFDuet-cpcA-cpcEF-hox1-pcyA质粒为模板，LHCⅡ-PCA-F和PCA-R为引物配制PCR体系，进行藻蓝蛋白α亚基cpcA基因与叶绿素结合蛋白LhcⅡ基因中目的片段LhcⅡ和cpcA的PCR扩增，然后切胶，进行胶回收；

(2)以胶回收得到的LhcⅡ片段和cpcA片段为模板，LHCⅡ-F、PCA-R为引物进行重叠PCR，得到融合片段LhcⅡ-cpcA，将PCR产物进行回收，得到融合基因片段，-20℃冰箱保存；

(3)将融合基因片段与T载体进行连接，连接体系由体积比为4:1:5的LhcⅡ-cpcA、pMD19-T和SolutionⅠ组成，得到pMD19-T-LhcⅡ-cpcA质粒，再取实验前期构建并保存于超低温冰箱的pCDFDuet-cpcA-cpcEF-hox1-

pcyA和pCDFDuet-cpcA-cpcEF-hox1-pebS质粒，分别使用限制性内切酶BamHⅠ、SacⅠ，37℃恒温水浴锅中分别对三种质粒进行双酶切，时长为16h，体系中DNA、BamHⅠ、SacⅠ、10×CutSmart Buffer、H₂O的体积比为30:1:1:5:13，进行连接后构建得到可表达的重组质粒，重组质粒为pCDFDuet-LhcII-cpcA-cpcEF-hox1-pcyA和pCDFDuet-LhcII-cpcA-cpcEF-

hox1-pebS，并将其分别转化进大肠杆菌工程菌株BL21感受态细胞中，将重组质粒进行表达制备；

(4)将收集的菌体进行悬浮、破碎、离心、过滤、上样、咪唑梯度洗脱，纯化出的蛋白进行脱盐后保存在-80℃冰箱；

(5)将纯化成功的融合蛋白与叶绿素a在体外进行超声处理、反复冻融以及脱盐，即得宽吸收光谱重组光合蛋白分子。