[发明专利]一种抗流行性感冒病毒EGS核酸药物的合成

说明书

本发明公开了一种抗流行性感冒病毒EGS核酸药物的合成，它包括以下步骤：步骤一，RNase P在EGS引导下对流行性感冒病毒基因mRNA进行切割的靶序列区域的确定；步骤二，EGS的设计:EGS的结构通常由5’结合区序列、tRNA的T茎环与额外环区序列及3’结合区序列三个部分组成；步骤三，EGS的人工合成：将设计好的EGS序列进行合成，备用；步骤四，合成的结果：根据序列通式5'‑U/CGNNNNNNU‑3'，在流感病毒八个基因片段中搜寻到100个左右潜在切点。本发明对某些基团进行化学修饰以提高其稳定性和导入效率，极大地提高EGS基因药物的效率，强化抗流感的广谱性。

技术领域

本发明涉及一种抗流行性感冒病毒EGS核酸药物的合成。

背景技术

流行性感冒病毒(Influenza virus)是流行性感冒（简称流感）的病原体。长期以来，流感一直是危害人类健康和公众安全的严重传染病，每年由此造成的经济损失也十分巨大。流感病毒属正粘病毒科甲型流感病毒属的单股RNA病毒。典型的病毒粒子呈球形，有囊膜，直径为80~120纳米，个别有长短不齐的丝状粒子，囊膜表面覆盖有紧密排列的纤突，分别为病毒的血凝素和神经氨酸酶蛋白。

根据NP蛋白性的不同，可将流感病毒分为A,B,C三型。根据HA和NA抗原性的差异，可分为不同亚型，迄今已发现16种HA（H1~H16）,10种NA（N1~N10）,任一种HA与任一种NA结合后即为一种血清亚型。在自然界，流感病毒在人以及猪和马等动物，尤其是鸟类中间持续流行。流感病毒基因组为分节段、单股负链RNA，共有8个独立的RNA片段。分别编码聚合酶PB1、PB2、PA、血凝素(HA)、核衣壳蛋白(NP)、神经氨酸酶(NA)、基质蛋白Ml和M2、非结构蛋白NS1和NS2。

流感病毒的聚合酶(Polymerase)由PB2、PB1和PA组成，由病毒RNA片段(1- 3)编码，其分子量依次为87KD.96KD.85KD。PB2，在病毒mRNA转录的起始阶段识别并结合在6’端I型帽状结构上，另外它还有限制性内切酶的活性，参与宿主mRNA帽状结构的切割。PB1，在病毒mRNA合成起始后使之逐渐延长。PA，在病毒RNA转录和复制过程中与PB1、PB2一起随链的延长而移动，主要参与病毒RNA的复制，与PB1、PB2共同构成RNA聚合酶复合体。在病毒RNA的合成过程中起蛋白激酶或解旋酶的作用。

血凝素(Hemagglutinin,HA)是构成流感病毒囊膜纤突的主要成分之一，由片段4编码。是结合宿主唾液酸之类的细胞受体，使病毒附着于细胞上，帮助病毒穿透宿主的细胞膜并改变抗原性，以逃脱宿主免疫系统的监视。

核蛋白(Nucleoprotein, NP)由片段5编码的结构蛋白.分子量为60KD，它是病毒核衣壳的主要蛋白成分。具有型特异性。

神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)也构成病毒囊膜的纤突，呈簇存在。NA是一种唾液酸酶，可以识别细胞表面流感病毒受体末端的唾液酸残基，使病毒能够进入细胞,NA的另一个功能是为要出芽的病毒粒子清理通道，防止病毒粒子聚集，有利于病毒粒子的成熟和释放。

基质蛋白(Matrixproteins,M )有两种基质蛋白Ml、M2。M1由252个氨基酸残基组成，分子量约为26KD,是所有蛋白成分中含量最多的一种，构成病毒的基质膜，具有型特异性。M2由97个氨基酸残基组成，分子量约为15KD。是一种跨膜蛋白，以四聚体的形式存在于感染细胞的细胞膜上。

非结构蛋白(Nonstructural Proteins, NS)有种非结构蛋白即NS1和NS2，分子量分别为25KD和12KD，NSl在感染的早期合成，NS2在感染的后期合成。NS1蛋白为结合蛋白，它具有抑制带poly(A)结构的mRNA从细胞核内向外运输的功能。NS2又叫核转出蛋白(NEP)，是磷酸化蛋白直接参与子代病毒RNP从病毒细胞中释放出来的过程。

目前抗流感病毒化学药物存在的主要问题包括耐药性、毒副作用和烷胺类药物对B型流感无作用三方面。