[发明专利]一种检测溶瘤病毒的探针及其应用

说明书

本发明涉及一种检测溶瘤病毒的探针，所述探针序列如SEQ ID No：1所示，且所述探针带有荧光标记物。所述探针首先与溶瘤病毒遗传物质结合，再进行定性、定位、相对定量分析。本发明的探针具有安全、快速、灵敏度高、能长期保存。本发明还提供了此探针在制备检测溶瘤病毒遗传物质在肿瘤组织中的表达位置和/或量变化的试剂盒中的应用，以及在检测生物样本是否感染溶瘤病毒系统中的应用，本系统不仅能检测生物样本是否感染溶瘤病毒，还能准确定位溶瘤病毒感染的位置与含量，具有快速、灵敏度等优点。

技术领域

本发明涉及癌症治疗领域及，具体涉及一种检测溶瘤病毒的探针及其应用。

背景技术

溶瘤病毒是一类具有复制能力的肿瘤杀伤型病毒，其原理是通过对自然界存在的一些致病力较弱的病毒进行基因改造制成特殊的溶瘤病毒，利用靶细胞中抑癌基因的失活或缺陷从而选择性地感染肿瘤细胞，在其内大量复制并最终摧毁肿瘤细胞，但无法在正常机体细胞内复制而不具有杀伤作用，理论上具有更高的抗肿瘤效应和更低的副作用，同时它还能激发免疫反应，吸引更多免疫细胞来继续杀死残余癌细胞。

然而，本行业人员都明确地知道，有时造成条件型增殖的结构可能使溶瘤病毒在正常细胞内增殖。即溶瘤病毒具有可在癌细胞内特异性增殖的结构，如在癌细胞内特异性地表现出启动子活性的启动子，因此可在癌细胞内特异性增殖，但正常细胞中也可能有能使此启动子发挥功能的细胞(如白细胞)。在将溶瘤病毒增殖的细胞作为癌细胞的癌细胞检测方法中，这种正常细胞可能会被作为癌细胞检测出来，因此有可能得出假阳性结果。

因此，本发明以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法，带有荧光标记的探针与溶瘤病毒遗传物质结合，杂交后可直接荧光显微镜观察。进行定性、定位、相对定量分析。原位杂交具有安全、快速、灵敏度高、探针能长期保存、能选择不同颜色标记等优点，能显示中期分裂相，还能显示于间期核。同时在荧光原位杂交基础上又发展了多彩色荧光原位杂交技术和染色质纤维荧光原位杂交技术。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种利用荧光标记取代同位素标记检测溶瘤病毒的探针及其应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为:一种检测溶瘤病毒的探针，所述探针的序列如SEQ ID No.1所示。

优选地，所述探针的5’端带有荧光标记物。

优选地，所述荧光标记物为Cy3、HEX、VIC、JOE、Cal Red 610、ROX、FITC、FAM或TEXAS RED中的任意一种。

优选地，所述荧光标记物为Cy3。

优选地，所述探针与溶瘤病毒的DNA或mRNA结合。

优选地，包含如权利要求1～4任一项所述的检测溶瘤病毒的探针。

本发明还提供一种用于确定生物样本感染溶瘤病毒的系统，包括：

制样单元，用于制备符合检测条件的生物样本；

检测单元，所述检测单元与所述制样单元相连，用于检测具有本发明所述的溶瘤病毒的探针的生物样本中是否具有荧光信号来确定所述生物样本是否感染溶瘤病毒；

分析单元，所述分析单元与检测单元相连，用于分析具有本发明所述的溶瘤病毒的探针的生物样本感染溶瘤病毒的位置。

优选地，所述检测单元适于将所述生物样本中具有本发明所述的溶瘤病毒的探针的荧光信号强弱在生物样本间进行比较，作为相对定量，或已知浓度阳性对照样品及阴性对照样进行比较，确定所述生物样本感染溶瘤病毒的含量。

荧光定量分析常采用直接比较法，将检测样品与已知物质放在激发光源下，根据它们所发荧光的性质、颜色和强度，鉴定它们是否含有同一荧光物质。检测样品在加入探针试剂后，其杂交上产物会产生荧光，测定荧光强度而推算被测样品浓度的检测方法。