[发明专利]一种检测细菌AmpC基因的引物组、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种检测细菌AmpC基因的引物组，其特征在于，所述引物组选自下列引物对中的至少两种；

2.一种检测细菌AmpC基因的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物组和辅助检测试剂。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述辅助检测试剂包括PCR缓冲液、脱氧核糖核苷三磷酸混合物、DNA聚合酶、水、阳性对照、阴性对照和DNA分子量内标中的一种或多种。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR缓冲液的主要成分包括Tris-HCl、KCl和MgCl₂的一种或多种。

5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述DNA聚合酶选自Taq、Bst、Vent、Phi29、Pfu、Tru、Tth、Tl1、Tac、Tne、Tma、Tih、Tf1、Pwo、Kod、Sac、Sso、Poc、Pab、Mth、Pho、ES4DNA聚合酶、Klenow片段。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述DNA聚合酶为Taq DNA聚合酶。

7.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照为含有所述基因CIT、ACC、FOX、MOX、DHA和EBC全长的一种或多种的pUC57质粒。

8.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述阴性对照为超纯水。

9.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括DNA提取试剂、核酸纯化试剂的一种或两种。

10.利用权利要求1所述的引物组或权利要求2～9任一项所述的试剂盒进行非诊断目的的细菌AmpC基因检测的方法，其特征在于，包括：

使用所述引物组或试剂盒对待检测细菌样本的总DNA或质粒DNA进行扩增，通过检测扩增产物中AmpC基因是否存在以确定所述检测细菌样本的AmpC基因；

优选地，在进行所述扩增时，扩增体系中所述基因DHA和EBC的各引物浓度为0.15～0.25mmol/L；更优选为0.20mmol/L；

所述耐药基因CIT、ACC、FOX和MOX的各引物浓度为0.35～0.45mmol/L；更优选为0.40mmol/L；

优选地，在进行所述扩增时，退火温度为60～69℃；更优选为65℃；

优选地，所述总DNA或质粒DNA的提取方法包括水煮法、机械法、溶解酶法、玻璃珠法或SDS苯酚法的一种。