[发明专利]一种氨基层析介质及其制备方法

说明书

本发明涉及一种氨基层析介质，由多糖微球和脂肪胺分别与缩水甘油醚两端的环氧官能基团开环反应而成。本发明还涉及到上述氨基层析介质的制备方法，先制备缩水甘油醚活化微球，然后与脂肪胺反应制得上述氨基层析介质。本发明的氨基层析介质氨基含量高，且制备方法简单。

技术领域

本发明涉及分离纯化技术领域，具体涉及一种氨基层析介质及其制备方法。

背景技术

目前制备含有多糖羟基微球的亲和层析介质的生产工艺中大致有两种方法，一种是以多糖上的羟基直接与亲和配基键合的直接制备方法，另一种是通过活化多糖上的羟基连接间隔臂，再通过间隔臂连接亲和配基的间接制备方法。其中，多糖上羟基采用活化工艺较多的是以环氧氯丙烷的活化方式形成带有活性的末端环氧基，主要与含有氨基的亲和配基进行反应，得到亲和层析介质。这是由于环氧基的三元环高度张力的存在,使得环氧基能在温和的条件下与伯胺基、巯基或羟基等亲核试剂发生开环反应,分别形成仲胺、硫醚或醚键。传统制备氨基亲和层析介质的工艺是将糖羟基与环氧氯丙烷反应，生成的环氧基再通过氨水键合氨基，环氧基与氨水的反应是一个不可逆的SN2亲核取代反应。由于环氧氯丙烷是单环氧功能基团，活化偶联上的环氧基效率较低，通过环氧氯丙烷活化得到的环氧基浓度较低，而且得到的环氧基是一个很短的中间臂，有较大的空间位阻效应。后续环氧基与氨水反应时，温度和氨水浓度对反应速率和转化率的影响较大，得到的氨基浓度较低。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种氨基浓度高的氨基层析介质以及制备方法。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：本发明的氨基层析介质的制备方法，包括以下步骤：

（1）制备缩水甘油醚活化微球；

（2）将所述缩水甘油醚活化微球与脂肪胺反应制得氨基层析介质；

所述步骤(1)中制备缩水甘油醚活化微球的步骤为：将多糖微球加入反应瓶中，加水并搅拌，然后依次加入缩水甘油醚、氢氧化钠、硼氢化钠，所述水、缩水甘油醚、氢氧化钠、硼氢化钠与所述多糖微球的质量比分别为200～1000∶100～500∶10～200∶1～10∶1000，加热至20～60℃，200～500rpm下搅拌反应16～24h，最后分别使用乙醇和水洗涤得到缩水甘油醚活化微球。

所述步骤(2)的具体步骤为：将所述缩水甘油醚活化微球加入反应瓶中，加水搅拌，然后依次加入碳酸盐、脂肪胺，所述水、碳酸盐、脂肪胺与所述缩水甘油醚活化微球的质量比分别为100～120∶1～120∶40～100∶200，调节pH至9～11，加热至20～60℃，200～500rpm下搅拌反应16～24h，最后使用纯水洗涤得到氨基层析介质；

所述缩水甘油醚为二缩水甘油醚、乙二醇二缩水甘油醚、1，4-丁二醇缩水甘油醚、1，6-己二醇二缩水甘油醚、丙三醇三缩水甘油醚、季戊四醇缩水甘油醚中的任一种。

进一步，所述多糖微球为琼脂糖微球、葡聚糖微球、纤维素微球中的一种，所述多糖微球的粒径为5μm-300μm。

进一步，所述碳酸盐为碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾中的任一种。

进一步，所述脂肪胺为己二胺、乙二胺、1,4-丁二胺、1,10-癸二胺、二乙烯三胺中的任一种。

本发明的有益效果是：

用本发明的制备方法制得的氨基层析介质的中间臂较长，降低了空间位阻效应，同时制备方法简单，反应条件易控制，大幅提高了氨基键合的转化效率，相比环氧氯丙烷法制得的氨基层析介质，本发明的氨基层析介质的氨基含量高出十倍，极大的提高了该氨基层析介质的载量。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

实施例1