[发明专利]一种血管扩张型刺激磷蛋白检测试剂盒

说明书

本申请涉及一种血管扩张型刺激磷蛋白检测试剂盒。所述试剂盒包含：包被有VASP单克隆抗体的磁颗粒、含有标记的VASP‑P单克隆抗体的酶工作液、裂解液、反应底物。所述试剂盒检测速度快、操作简便、灵敏度高、特异性好。

技术领域

本申请属于分子免疫学领域，具体涉及一种血管扩张型刺激磷蛋白(以下简称VASP)检测试剂盒、以及VASP单克隆抗体及其用途。

背景技术

随着我国社会经济发展，心脑血管疾病发病率呈逐年增高趋势，其高致残率和高死亡率对人民健康构成严重威胁并给社会带来沉重负担。

大量临床试验和医学研究显示心脑血管疾病具有共同的危险因素和病理生理机制，其中血小板活化是发病和病程进展中的关键环节。因此积极抗血小板治疗已成为防治心血管疾病的核心策略之一。

通过抑制血小板黏附、聚集和释放，抗血小板治疗实现防止血栓形成、降低缺血性心脑血管发生率的目的。现阶段常用的抗血小板药物包括如下几类：环氧化酶(COX)抑制剂、磷酸二酯酶抑制剂、二磷酸腺苷受体拮抗剂、糖蛋白IIb/IIIa拮抗剂、蛋白酶激活受体1拮抗剂、TXA2受体拮抗剂。

VASP磷酸化检测法基于ADP P2Y12受体途径的活化，是特异性最高的P2Y12受体抑制剂检测方法，不受其他抗血小板药物的影响。因此，一种快速检测VASP磷酸化的方法对评价血小板功能以及对临床指导用药有重要的意义。

VASP含有380个氨基酸，其结构主要包括3个部分：N端1(Ena/VASP homology 1，EVH1)区域、富含脯氨酸区域(poly-proline region，PPR)、C端2(Ena/VASP homology 2，EVH2)区域。EVH-1主要调节VASP、斑联蛋白、黏着斑蛋白之间的交互作用；VASP的中心区域与前纤维蛋白结合，通过后者与F肌动蛋白相连，PPR参与调节抑制蛋白和白蛋白；EVH2区域则通过影响细胞间的连接方式来调节肌动蛋白的结合，主要参与VASP对细胞运动的调节。VASP主要通过磷酸化进行功能调节，且由于其特殊的空间构成，使得VASP能够参与各类细胞中细胞骨架的调节。VASP含有以下5个明确受磷酸化调控的位点：酪氨酸39(Tyr，Y-39)、丝氨酸157(Ser，S)、S-239、苏氨酸278(Thr，T-278)、S-322。每个位点功能既彼此区别又相互协同，共同解释了VASP的功能作用。

腺苷二磷酸通过与血小板膜上的P2Y12受体结合，促进腺苷酸环化酶生成，进而抑制环磷酸腺苷的合成，以促进血小板活化。氯吡格雷的药理机制即作用于血小板膜上P2Y12受体，通过促进VASP磷酸化而抑制血小板的活化。而前述环磷酸腺苷合成阶段，即可检测到VASP磷酸化的具体情况。根据此原理量化检测VASP的磷酸化程度，可据此计算出血小板反应指数。

迅速、准确地判断患者血小板功能及其对抗血小板药物的反应，将有助于减少药物抵抗的发生，调整个体化抗血小板治疗，进一步降低血栓性及出血性事件的发生。

Osmancik等通过VASP监测，对不同严重程度的急性心肌梗死患者的氯吡格雷效用进行评估。发现在服用负荷剂量的氯吡格雷后，血流动力学稳定的ST段抬高型心肌梗死患者，其VASP指数有明显的降低，认为患者的血小板功能在服用氯吡格雷后受到有效抑制。但对于血流动力学不稳定的患者(包括需用升压药物或机械通气支持者)，其VASP指数下降程度极为有限。因此，实现了精确评估的作用。

Grdinic等人通过VASP检测发现，34％的高危经皮冠状动脉介入治疗患者在接受300mg负荷剂量的氯吡格雷后，出现了氯吡格雷抵抗。另有研究发现，支架内血栓的生成与高于50％的VASP指数有极紧密的相关性

Bonello等通过VASP指数指导干预并观察主要不良心血管事件(major adversecardiovascularevents，MACE事件)的发生情况。该研究还证实了VASP指数评估的高敏感性，可通过此方法对血小板功能进行简单而有效的评测。