[发明专利]检测人血浆中伏立康唑浓度的HPLC方法

说明书

本发明公开了一种检测人血浆中伏立康唑浓度的HPLC方法，涉及医疗技术领域，该检测人血浆中伏立康唑浓度的HPLC方法建立了HPLC法测定人血浆中伏立康唑血药浓度，旨在为临床合理用药提供参考。该方法包括步骤：色谱条件、溶液配制、血浆样品处理、伏立康唑和内标氯唑沙宗的保留、取适量伏立康唑储备液、配制伏立康唑、配制伏立康唑、取低、中、高质量浓度的质控血浆样品。该方法操作简便，结果准确，适用于人血浆中伏立康唑的检测，可以帮助避免血药浓度过低或过高可能导致的疗效不佳或不良反应增多。该检测人血浆中伏立康唑浓度的HPLC方法的实验结果符合生物样品的测定要求，适用于临床治疗药物浓度监测及药动学研究。

技术领域

本发明涉及医疗技术领域，特别涉及一种检测人血浆中伏立康唑浓度的HPLC方法。

背景技术

伏立康唑是一种广谱三唑类抗真菌药物，临床常用于治疗侵袭性肺曲霉病、念珠菌血症等侵袭性真菌病。该药药代动力学呈现非线性特征，患者年龄、体重、肝功能、基因多态性、合并用药等因素均会影响其体内过程，使得血药浓度个体间和个体内差异较大。伏立康唑血药浓度与临床疗效和安全性存在密切联系，血药浓度过低或过高可能导致的疗效不佳或不良反应增多。目前国内外报道的测定方法主要有HPLC法和LC-MS/MS法，日本化疗学会和日本治疗药物浓度学会已明确推荐采用HPLC法或LC-MS/MS法用于测定伏立康唑血药浓度。考虑LC-MS/MS法样品处理较为复杂，仪器昂贵，国内医院应用并未普及。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种检测人血浆中伏立康唑浓度的HPLC方法，建立了HPLC法测定人血浆中伏立康唑血药浓度，旨在为临床合理用药提供参考。

为实现上述目的，本发明提供以下的技术方案：

该检测人血浆中伏立康唑浓度的HPLC方法包括如下步骤：

(1)色谱条件：色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse Plus C18(100mm×4.6mm，3.6μm)；流动相∶乙腈-0.01mol·L^-1磷酸二氢钾溶液(35∶65)；流速0.8mL·min^-1；柱温35℃；进样体积15μL；检测波长260nm；

(2)溶液配制：对照品溶液精密称取伏立康唑对照品25mg，甲醇溶解并定容至25mL，得到质量浓度为1.0g·L^-1的伏立康唑储备液，置4℃冰箱冷藏备用；内标溶液精密称取氯唑沙宗10mg，甲醇溶解并定容至100ml，得到质量浓度为100mg·L^-1的氯唑沙宗储备液，置4℃冰箱冷藏备用；

(3)血浆样品处理：精密移取血浆样品200μL，加入100mg·L^-1的氯唑沙宗内标溶液50μL，加入400μL甲醇溶液，涡旋混匀1min后于14000r·min^-1及4℃条件下离心10min，取上清液15μL进样；

(4)伏立康唑和内标氯唑沙宗的保留时间分别为7.86min和4.60min，考察6份不同的空白血浆，结果表明色谱分离良好，血浆中的内源性物质均不干扰血浆中伏立康唑的分析；

(5)取适量伏立康唑储备液，用甲醇定量稀释成系列标准溶液，再加入适量空白血浆制得伏立康唑质量浓度分别为0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0和20.0mg·L^-1的系列标准血浆样品溶液，按步骤(3)处理后，测定伏立康唑峰面积Ai，内标锋面积As，以Ai/As为纵坐标，所对应各点浓度(ρ)为横坐标绘制标准曲线，经最小二乘法线性回归，得伏立康唑的标准曲线回归方程y＝0.14ρ+0.0028(r＝0.9999)，按RSN＝5确定最低定量限，血浆中伏立康唑的最低定量限为0.2mg·L^-1；