[发明专利]一种牛耳枫两步成苗的方法

说明书

本发明属于植物组织培养技术领域，尤其是一种牛耳枫两步成苗的方法。一种牛耳枫叶片两步成苗的方法，包括以下步骤：(1)取新萌发牛耳枫的嫩叶作为外植体按常规的进行消毒后，置于超净工作台内，用解剖刀切叶片边缘，剪切成1cm见方的小块，置于改良WPM培养基中培养35天，得到无菌试管苗；(2)生根培养；(3)炼苗移栽。采用本发明所述的培养方法得到的牛耳枫丛生芽繁殖系数达到30‑40倍，丛生芽健壮，接种到生根培养基后容易生根，生根率可达90％以上。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，尤其是一种牛耳枫两步成苗的方法。

背景技术

牛耳枫(Daphniphyllum calycinum Benth.)别称：铃猪肚、猪肚果、猪肚木、猪肚子、猪洛木、猪络木、猪仔木、珠碌子、山羊屎、羊屎子、老虎耳、土鸦胆子、大耳梳、南岭虎楠、南岭虎皮楠及岭南虎皮楠。为虎皮楠科虎皮楠属植物。

牛耳枫的果实枝叶和根均可入药，枝叶：祛风止痛；解毒消肿。主风湿骨痛；疮疡肿毒；跌打骨折；毒蛇咬伤。根：清热解毒；活血化瘀；消肿止痛。主外感发热；咳嗽；咽喉肿痛；胁下痞块；风湿骨痛；跌打损伤，其种子油含有毒性的生物碱，加热后毒性下降，可供作润滑油及肥皂。具有很高的药用价值和开发前景。

迄今为止，未见牛耳枫组织培养相关报道。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种牛耳枫叶片两步成苗的方法，它能够快速繁殖出大量适合移栽的优良牛耳枫种苗、满足生产需要。

本发明是通过以下技术方案来实现的：

一种牛耳枫叶片两步成苗的方法，包括以下步骤：

(1)取新萌发牛耳枫的嫩叶作为外植体按常规的进行消毒后，置于超净工作台内，用解剖刀切叶片边缘，剪切成1cm见方的小块，置于改良WPM培养基中培养35天，得到无菌试管苗；

(2)生根培养：将步骤(1)中得到的健壮植株置于改良1/2MS生根培养基中培养30天，得到完整带根苗；

(3)炼苗移栽：将所述完整带根苗在室温为25℃的室内打开瓶盖，瓶内加入3-10mL无菌水，炼苗4-7天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基立即移栽到按质量比为蛭石：泥炭土＝1：1的基质中，生长一个月后移栽到大田，每天早晚各喷雾一次。

作为优选，所述的改良WPM培养基中含0.5-2.0mg/L的芸苔素内脂、0.1-0.5mg/L的吲哚丁酸、0.1-0.5mg/L的激动素、0.5-2.0mg/L的赤霉素、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。

作为优选，步骤(1)中培养条件为：温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天。

作为优选，所述的改良1/2MS生根培养基中添加0.5-2.0mg/L萘乙酸、50g/L的土豆泥、10g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。

作为优选，步骤(2)中培养条件为：温度为23-27℃，光照强度3000lux，光照时间为8-10小时/天。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

(1)本发明采用生物技术对牛耳枫进行组织培养快速繁殖，通过牛耳枫叶片丛生芽的繁殖，在短时间内可培育出大量适合栽培种植的牛耳枫幼苗，保障牛耳枫种苗的增殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。