[发明专利]一种植酸酶发酵液中植酸酶活性的测定方法和装置

说明书

本发明提供了一种发酵液中植酸酶活性的测定方法，本发明提供的方法可以准确测定发酵液中植酸酶的活性，且避免了传统方法中植酸酶发酵液中磷对检测过程的干扰，避免了长时间的样品透析预处理，且本发明提供的方法操作简单。此外，本发明提供了一种发酵液中植酸酶活性的测定装置，采用本发明提供的测定装置可以准确测定发酵液中植酸酶的活性，且本发明提供的装置结构简单、无需使用昂贵的部件，便可实现植酸酶发酵液中植酸酶活性的测定。

技术领域

本发明涉及生物酶活性测定技术领域，尤其涉及一种植酸酶发酵液中植酸酶活性的测定方法和装置。

背景技术

植酸酶是催化植酸及植酸盐水解为肌醇和磷酸(或磷酸盐)的一类水解酶的统称，在饲料、食品、环境和医药等领域有着广泛应用。植酸酶活力测定对发酵生产植酸酶过程的优化控制具有重要的意义，也是产品质量控制和保证使用效果的关键环节。

植酸酶发酵液中植酸酶活性的测定主要采用比色法。目前应用较广的有钼酸铵-FeSO₄法、钼酸铵-VC法、钼酸铵-氨基奈酚磺酸法以及钒钼法。其中钒钼法于1994年被美国分析化学专家列入AOAC(Associ-ation of Analytical Communities)标准方法，我国也于2002年将钒钼法作为测定饲用植酸酶活性的国家标准。这些方法的基本原理是：植酸酶作用于植酸及植酸盐会释放出无机磷，无机磷在酸性条件下与钼酸盐发生反应，产生磷钼蓝，其最大吸收波长为720nm。当无机磷含量在一定范围内时，与磷钼蓝颜色的深浅成正比。通过测定显色后溶液的吸光度，定量的测定发酵液中植酸酶作用底物植酸或植酸盐释放的无机磷的量，进而计算出植酸酶的活力。该方法测定过程中，不仅样品的颜色、浊度等都有干扰，最大的问题是发酵液中无机磷含量往往较高，在短时间内植酸酶分解植酸钠释放出的无机磷，要比发酵液中原先含有的无机磷低得多，为此，需要对样品进行长时间的透析除磷预处理和酶反应过程，不能满足发酵生产中大批量、多批次快速、准确检测的需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种植酸酶发酵液中植酸酶活性的测定方法和装置，所述方法避免了发酵液中磷的干扰，省略了长时间的样品透析预处理；减少了发酵液样品颜色及浑浊造成的终点判断误差，提高了植酸酶活性测定的准确性。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种植酸酶发酵液中植酸酶活性的测定方法，包括以下步骤：

将植酸酶发酵液进行稀释，得到植酸酶发酵液稀释液；

将所述植酸酶发酵液稀释液、乙酸缓冲液和植酸钠溶液混合，将所得体系进行酶解反应，当所述酶解反应的时间为T时，向所得体系中加入三氯乙酸-乙酸缓冲液终止所述酶解反应，得到待测样品液；

以磺基水杨酸溶液-乙酸缓冲液为工作液，采用三氯化铁溶液对所述待测样品液进行滴定，至工作液指示反应终点时结束滴定，根据预定的植酸钠消耗的物质的量与滴定时间的线性标准曲线，得到植酸钠消耗的物质的量为S_x；

利用E＝(S₀-S_x)×d/T，计算得到植酸酶发酵液中植酸酶活性；

其中，E为植酸酶发酵液中植酸酶活性，S₀为酶解反应前体系中植酸钠的物质的量，S_x为滴定完成后的植酸钠消耗的物质的量，T为酶解反应的时间，d为植酸酶发酵液的稀释倍数。

优选的，所述酶解反应的时间为28～32min，酶解反应的温度为35～39℃。

优选的，所述植酸钠溶液与植酸酶发酵液稀释液的体积比为(1.8～2.2)：1。

优选的，所述三氯化铁溶液的浓度为0.018～0.022mol/L。

优选的，所述线性标准曲线的获得方法，包括以下步骤：