[发明专利]一种金丝皇菊茎尖离体再生的方法

权利要求书

1.一种金丝皇菊茎尖离体再生的方法，其特征在于：依次包括顶芽的预培养、茎尖的剥取、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、不定芽的伸长、不定芽的体外生根及成苗管理的步骤。

2.根据权利要求1所述的金丝皇菊茎尖离体再生的方法，其特征在于：所述顶芽的预培养是指将金丝皇菊顶芽表面消毒后接种于添加0.05～0.5mg/L GA3、25g/L蔗糖和7.0g/L琼脂的1/2MS培养基中，于温室中进行光照预培养。

3.根据权利要求2所述的金丝皇菊茎尖离体再生的方法，其特征在于：所述金丝皇菊的顶芽取材于田间高产株系的金丝皇菊当年生顶芽。

4.根据权利要求1所述的金丝皇菊茎尖离体再生的方法，其特征在于：所述金丝皇菊茎尖的剥取是指在无菌条件下，从预培养3～5d的金丝皇菊顶芽上剥取长为0.5～2.0mm大小的茎尖。

5.根据权利要求1所述的金丝皇菊茎尖离体再生的方法，其特征在于：所述茎尖愈伤组织诱导是指将茎尖接种于愈伤组织诱导培养基中进行愈伤组织的诱导培养；其中所述的愈伤组织诱导培养基为0.2～2.0mg/L 2,4-D、0.05～0.5mg/L IAA、25g/L蔗糖和7.0g/L琼脂的MS培养基。

6.根据权利要求1所述的金丝皇菊茎尖离体再生的方法，其特征在于：所述愈伤组织的分化是指将诱导出绿色愈伤组织的茎尖转接于分化培养基中进行愈伤组织的分化培养，其中所述的分化培养基为添加0.2～2.0mg/L TDZ、0.05～0.5mg/LNAA、25g/L蔗糖和7.0g/L琼脂的MS培养基。

7.根据权利要求1所述的金丝皇菊茎尖离体再生的方法，其特征在于：所述不定芽的伸长培养是指将分化出不定芽的愈伤组织转接于伸长培养基中进行不定芽的伸长培养，其中所述的不定芽伸长培养基为添加0.05～0.5mg/L TDZ、0.05～0.2mg/LNAA、25g/L蔗糖和7.0g/L琼脂的MS培养基。

8.根据权利要求1所述的金丝皇菊茎尖离体再生的方法，其特征在于：所述不定芽的体外生根是指将高度为2～4cm，带2～4完整叶片的不定芽经表面消毒后，经生根诱导处理后定植于喷施有0.1～0.5％高锰酸钾溶液的营养土中进行体外生根；其中所述的伸长芽表面消毒是指将不定芽用流水冲洗3～5min后，用终浓度为0.1～0.5％高锰酸钾溶液消毒10～30s。

9.根据权利要求8所述的金丝皇菊茎尖离体再生的方法，其特征在于：所述生根诱导处理是指将不定芽基部用添加500～1000mg/L IBA、25～100mg/LVC和5～50mg/L亚精胺的混合溶液处理5～30s。

10.根据权利要求1所述的金丝皇菊茎尖离体再生的方法，其特征在于：所述成苗管理是指将待体外生根的苗盖上遮阳网，置于温度为20～28℃，湿度为80～90％的温室大棚中，每隔4～5d浇次水，每隔7-10d喷施一次营养补液；所述营养补液成分为MS基本培养液。