[发明专利]水稻OsRacD基因在提高水稻穗长中的应用

权利要求书

1.水稻OsRacD基因在提高水稻穗长中的应用，其特征在于：所述水稻OsRacD基因的核苷序列如SEQ ID NO:1所示，具体过程为：首先构建水稻OsRacD基因的RNA干扰植物表达载体，通过农杆菌介导的方法转化至水稻愈伤组织，诱导分化为再生水稻植株，然后经逐代筛选直至获得T2代OsRacD基因RNA干扰转基因水稻；

具体步骤为：

步骤S1：水稻OsRacD基因RNA干扰载体的构建：TRIzol法提取水稻幼穗总RNA，反转录制备水稻幼穗cDNA，设计引物P1：5’-CACCAGCCTCCAAAGCAAAAG-3’和引物P2：5’-AGAGACCAACACCACAAAGG-3’，引物P1中含有保护碱基CACC，以水稻幼穗cDNA为模板，通过PCR扩增OsRacD基因干扰片段，PCR产物连接到入门载体pENTR/D gateway的相应位点，连接产物转化TOP10感受态细胞，在含有卡那霉素的LB平板上筛选转化子，经测序确认后命名为pENTR-OsRacD，pENTR-OsRacD载体与pANDA载体进行LR反应，然后将连接产物转化入大肠杆菌DH5α感受态细胞中，在含有卡那霉素和潮霉素的LB平板上筛选阳性克隆进行菌液PCR检测及酶切检测，验证后的载体命名为pANDA-OsRacD；

步骤S2：T2代OsRacD基因RNA干扰转基因水稻的获取：采用农杆菌浸染法将pANDA-OsRacD载体转化至水稻愈伤组织，再利用含有潮霉素的N6D2S1和N6D2S1培养基筛选阳性愈伤组织，进一步诱导培育再生阳性转基因植株，然后经逐代筛选直至获得T2代OsRacD基因RNA干扰转基因水稻，同一批次的对照水稻和T2代OsRacD基因RNA干扰转基因水稻的平均穗长分别为18.97±0.66cm和20.34±0.67cm，T2代OsRacD基因RNA干扰转基因水稻的平均穗长提高了7.22%-7.51%。