[发明专利]麦冬皂苷D及其纳米乳在制备疫苗佐剂中的应用

说明书

本发明涉及麦冬皂苷D及其纳米乳佐剂在制备疫苗佐剂中的应用。本发明筛选出具有显著疫苗佐剂活性的免疫刺激分子麦冬皂苷(OP‑D)，并通过低能乳化法成功制备出具有显著提高麦冬皂苷溶解度，质量稳定，粒径在1‑100纳米范围内的麦冬皂苷纳米乳(NOD)佐剂。通过体内外的急性毒性和细胞毒性研究证实，该纳米乳佐剂具有明显减低其毒副作用，能较好诱导疫苗抗原免疫应答，减低细菌定植量，提高动物的存活率和延长动物的存活时间，具有显著增强疫苗保护效果的作用。本发明研究证实，该免疫刺激分子OP‑D及其纳米乳佐剂能够发挥疫苗佐剂效果，具有良好的应用前景与实际应用价值。

技术领域

本发明属于疫苗佐剂技术领域，涉及麦冬皂苷D及其纳米乳佐剂制备方法及应用。

背景技术

疫苗接种仍然是控制和预防传染病最具成本效益和意义的生物医学方法。特别是，重组蛋白疫苗具有一些明显的优势，尽管这些疫苗通常不那么具有免疫性，无法引起足够的免疫反应，需要外源性疫苗佐剂来增强其效力。不幸的是，尽管目前可获得的疫苗种类繁多，但已被批准用于使用的疫苗佐剂却很少。由于这些化合物可能增加抗原的免疫原性，铝盐被广泛用作疫苗佐剂。然而，铝佐剂也有一些缺点，如与这类佐剂相关的细胞免疫反应弱。因此，研发新的疫苗佐剂尤为重要。

传统中药麦冬因其强大的滋补作用而在历史上一直被广泛使用，这种中药最近被作为参麦散血脑的主要成分进行研究，但没有任何有关麦冬在佐剂中的应用。麦冬皂苷D(OP-D)是麦冬的主要药理活性成分，具有抑制静脉血栓形成、抗炎和抗氧化活性等药理作用。OP-D与其他皂苷一样，具有单糖链结构，其被认为是佐剂的活性中心。然而，在OP-D的开发应用中仍存在许多问题，如溶解度差和溶血作用强。

麦冬皂苷D皂苷能激活哺乳动物的免疫系统，这一发现引起了人们对其作为疫苗佐剂的潜在用途的极大兴趣。近期研究表明，QS-21作为皂苷的典型代表，在诱导抗体和细胞介导的免疫应答中具有较强的佐剂活性。因此，QS-21现在是许多试验疫苗的候选佐剂，包括HIV-1、癌症、乙肝、疟疾和其他疫苗。然而，QS-21由于某些缺陷，如Th2免疫反应低、溶血作用强、来源稀少等，在临床应用中应用有限。最近的研究表明，QSA-21是皂苷的典型代表，在诱导抗体和细胞介导的免疫应答方面具有很强的佐剂活性。因此，QS-21现在是许多试验疫苗的候选佐剂，包括HIV-1疫苗、癌症、乙型肝炎、疟疾和其他。然而，由于某些缺陷，如低Th2免疫应答、强溶血效应和非常稀少的来源，QS21在临床应用中的应用有限。尽管如此，各种单体皂苷也被证实具有很强的佐剂活性，尽管这些皂苷也有缺点。例如，喹啉A及其皂苷(如QS-21)的佐剂活性已被证明在兽医和人类疫苗的研究中，但高毒性和不希望的溶血作用是限制其在人类疫苗中使用的主要限制因素。此外，人参皂苷可诱导Th1和Th2免疫应答，根据抗原和种类而变化，但是，高剂量和低度佐剂需要与其他佐剂结合以增强效果。因此，皂苷作为佐剂的应用正受到越来越多的关注，因为其临床应用前景巨大。

众所周知，使用合适的疫苗佐剂和疫苗给药系统是设计理想疫苗的重要因素。申请人前期及最近研究表明，直径为1-100nm的纳米乳液由表面活性剂或助表面活性剂、油和水组成，具有高度热力学稳定性，并形成单一的光学各向同性液体。这种组合已经显示出有效的疫苗佐剂活性，特别是由完整病毒组成的纳米乳佐剂疫苗，如呼吸道合胞体流感和HIV。申请人最近的研究表明，纳米乳液为基础的佐剂可以有效地诱导广泛的粘膜免疫应答。此外，纳米乳液清楚地提高牛血清白蛋白或重组蛋白(HLAH35LISBD34-465)的稳定性，同时保持良好的结构完整性、特异性和相对生物活性。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种麦冬皂苷D及其纳米乳在制备疫苗佐剂中的应用。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

麦冬皂苷D在制备疫苗佐剂中的应用。

优选的，所述疫苗佐剂中所含麦冬皂苷D的浓度为0.75～12mg/kg。

一种疫苗佐剂，包含麦冬皂苷D。