[发明专利]一种蛋白提取和分离纯化方法

权利要求书

1.一种蛋白提取和分离纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、将螺旋藻洗净沥干后，置于低温超高压连续细胞破碎机中，进行低温破壁，得到一次破壁的螺旋藻破壁粉；

S2、将一次破壁的螺旋藻破壁粉置于-15℃条件下，冷冻脆化3～5h后，在30～40℃条件下，进行超声波破壁处理，得到二次破壁的螺旋藻破壁粉；

S3、向二次破壁的螺旋藻破壁粉加入二次破壁的螺旋藻破壁粉重量0.1～0.3倍的0.1mol/L的NaCl溶液，同时加入二次破壁的螺旋藻破壁粉重量0.04～0.06倍的711阴离子交换树脂，用组织捣碎机磨浆0.5～1.5min得到匀浆液，过滤，调节滤液的pH值至7.1～7.3，快速加热滤液至45～55℃，并维持20～40min，然后迅速冷却至20℃，然后转入离心机离心得到离心上清液；

S4、取所得的离心上清液，用硫酸铵盐析，取45％～55％盐析出的蛋白质沉淀段得到沉淀A；

S5、将沉淀A用柱平衡缓冲液溶解得到蛋白初溶液B，将蛋白初溶液B通过经缓冲液平衡过的葡聚糖凝胶G-50柱，以1.5ml/min的流速洗脱，收集第6～7ml的洗脱液即为分离得到的蛋白溶液；

S6、向蛋白溶液中加入1～2倍体积的缓冲溶液，再通过3000r·min^-1离心30min除去残留的不溶性物质，采用透析袋在蒸馏水中透析3d，除去硫酸铵，冷冻干燥，即得螺旋藻蛋白粉末。

2.如权利要求1所述的一种蛋白提取和分离纯化方法，其特征在于，所述步骤S1中在-10～10℃、压力170MPa、CO₂气体保护的条件下进行低温破壁。

3.如权利要求1所述的一种蛋白提取和分离纯化方法，其特征在于，所述步骤S2中超声破壁的条件为：超声频率为18～24千赫兹，时间为4～16min，转速为20～50rpm。