[发明专利]利用交联酶聚集体固定化方法制备马拉硫磷水解酶有效
| 申请号： | 201810842842.X | 申请日： | 2018-07-27 |
| 公开（公告）号： | CN109136212B | 公开（公告）日： | 2022-05-13 |
| 发明（设计）人： | 白云鹏;赵玉莲;张晓彦;徐殿胜 | 申请（专利权）人： | 华东理工大学 |
| 主分类号： | C12N11/089 | 分类号： | C12N11/089;B09C1/10;C02F3/34;C11D3/386;C02F101/34 |
| 代理公司： | 上海科盛知识产权代理有限公司 31225 | 代理人： | 蒋亮珠 |
| 地址： | 200237 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 交联 聚集体 固定 方法 制备 马拉硫磷 水解 | ||
【权利要求书】：
1.一种利用交联酶聚集体固定化马拉硫磷水解酶的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
（1）往马拉硫磷水解酶溶液中加入硫酸铵并搅拌均匀，使得溶液中的硫酸铵终浓度为0.4-0.7g/ml，通过盐析得到马拉硫磷水解酶的聚集体，盐析温度为0-10℃，盐析时间为15-60 min；所述的马拉硫磷水解酶的来源为食油假单胞菌 (
（2）将聚醚加入上述聚集体中，得到聚集体和聚醚的结合物；聚醚平均分子量为8000-15000，聚醚与马拉硫磷水解酶的质量比为1:1-1:6，反应温度为0-10℃，反应时间为15-60min；
（3）最后加入戊二醛进行交联反应，结束后离心或过滤得到的不溶性颗粒即为固定化酶，戊二醛的终浓度为60-120 mM，交联反应温度为0-10℃，反应时间为1-5小时；
所述的聚醚为Pluronic F127。
2.根据权利要求1所述的一种利用交联酶聚集体固定化马拉硫磷水解酶的制备方法，其特征在于，步骤1所述的马拉硫磷水解酶的浓度是10-40 mg/ml。
3.根据权利要求1所述的一种利用交联酶聚集体固定化马拉硫磷水解酶的制备方法，其特征在于，步骤3所述的离心的分离条件为12000 rpm时间3 min。
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