[发明专利]一种基于双峰驼抗山羊痘病毒VHH-4-1及用途

说明书

本发明提供了一种基于双峰驼抗羊痘病毒VHH‑4‑1及用途，属于生物技术领域，包含抗山羊痘病毒VHH‑4‑1，VHH‑4‑1的筛选、表达、纯化、功能化标记以及活性验证，山羊痘病毒的浓缩、纯化，试剂盒各项指标的优化等。本发明提供的试剂盒由于使用了功能化标记的VHH‑4‑1，避免了一抗、二抗以及抗抗体等步骤，提高了灵敏性、稳定性，缩短了时间，节约了资源。突破了传统Elisa方法费时、费力等缺陷。本发明的提出为建立敏感山羊痘病毒的临床诊断方法，研究病毒的感染机理奠定基础；也为本发明研制出的山羊痘病毒抗体固相竞争Elisa试剂盒提供了关键标识物；另外，利用山羊痘弱毒苗经细胞扩大培养、浓缩、纯化后作为包被抗原，提高了灵敏度。

技术领域

本发明属于生物学领域，涉及双峰驼源，特别涉及一种基于双峰驼源抗山羊痘病毒单域抗体VHH-4-1及用途。

背景技术

羊痘是由绵羊痘/山羊痘病毒或者混合感染引起绵羊、山羊发热、少毛或者无毛部位皮肤粘膜发生丘疹或疱疹的一种急性、热性、高度接触性传染病，发病率、病死率高，是所有动物痘病中最为严重的一种。因其与羊传染性脓疱（俗称羊口疮）存在临床症状上的相似性、血清学反应的交叉性，以及内脏型羊痘的频发给该病的确诊造成更大的困难。

单域抗体（VHH）是目前可以获得的具有结构稳定、功能完整、可结合抗原的最小结构单元，由于其免疫原性低、易表达、亲和力高、耐热等特点，靶向导引剂、化学传感器、抗毒血清以及抗病毒免疫制剂，越来越多地应用于生物探测、诊断、制药等领域，成为当前分子影像研究的重要靶标分子。近几年研究者依次应用抗口蹄疫病毒VHH、抗猪瘟病毒VHH以及抗猪圆环病毒VHH等不但进行口蹄疫病毒、猪瘟病毒及猪圆环病毒体外示踪研究，同时还进行了相应血清抗体的监测研究（Di Wang et al. Characterization of single-domainantibodies against Foot and Mouth Disease Virus (FMDV) serotype O from acamelid and imaging of FMDV in baby hamster kidney-21 cells with single-domain antibody-quantum dots probes[J] BMC Veterinary Research (2015) 11:120.Shunli Yang et al. A phage-displayed single domain antibody fused to alkalinephosphatase for detection of porcine circovirus type2[J]. Journal ofVirological Methods 213 (2015) 84–92. Specific detection of foot-and-mouthdisease serotype Asia 1 virus by carboxyl-magnetic beads conjugated withsingle-domain antibody BMC Biotechnology (2015) 15:83.）。Wang等以重组大鼠肺部SPA作为抗原，通过免疫羊驼产生能特异性结合SPA的单域抗体Nb17并证明抗SPA的单域抗体能高亲和力地结合到大鼠肺部，然后通过对Nb17抗体作用于大鼠急性和慢性毒性的研究发现，Nb17抗体不会导致大鼠机体明显的组织学改变，故确定将Nb17抗体应用于大鼠是安全的。（Wang SM，He X，Li N，et al. A novel nanobody specific for re⁃spiratorysurfactant protein A has potential for lung targeting［J］.Int J Nanomed，2015，10：2857-2869. ）单域抗体在犬细小病毒、犬瘟热中也得到广泛应用。但是进行ELISA时需要使用一抗、二抗，费时费力、实验操作过程繁琐，成本高；另外，利用表达某个蛋白作为包被抗原，使准确性和敏感性降低。

发明内容