[发明专利]一种分子信标-G四链体光学传感器及其在检测SV40病毒中的应用

说明书

本发明公开了一种分子信标‑G四链体光学传感器及其在检测SV40病毒中的应用。该传感器包括分子信标，所述分子信标呈发夹结构，其包括G‑四链体序列、能与目标双链DNA特异性结合的环状区，以及能阻止G‑四链体结构形成的茎状区；分子信标的序列为：5'‑CCCTACCCTTTTTTCTTCTCTTTCC(T)₆GGGTAGGGCGGGTTGGG‑3'。本发明可以根据荧光强度的变化来实现SV40病毒特异性目标双螺旋DNA的定量检测，在SV40病毒的检测中发挥重要作用，其最大线性检测范围为5～300 nmol/L，检出限为3 nmol/L，相关系数为0.992，同时具有良好的选择性，应用前景广阔。

技术领域

本发明属于生物化学分析技术领域。更具体地，涉及一种分子信标-G四链体光学传感器及其在检测SV40病毒中的应用。

背景技术

猿猴空泡病毒40(Simian Virus 40，SV40)属于乳多空病毒科(Papovaviruidae)，多瘤病毒是DNA肿瘤病毒中的一员，可以诱导细胞异常增值或导致肿瘤。SV40是Sweet和Hileman在1960年发现分离的猴肾细胞病毒，在人体内寄生，它由结构蛋白(VP1，VP2，VP3)和两种抗原(LT和st)共同构成。据报道，大量人群因使用被SV40污染的猴肾细胞培养脊髓灰质炎疫苗而感染SV40病毒。此外它还可以通过血液和粪口途径在人群中传播，感染的数量以每年1.2％的速度递增，对人类健康产生了威胁。国外学者利用PCR方法检测了SV40基因在人体各类肿瘤中的分布情况，结果显示，SV40基因在人间皮细胞瘤、室管膜瘤、胶质细胞瘤、骨瘤及骨肉瘤、淋巴中的携带率分别为83％、75％、47％、33％和13％，说明SV40与人体肿瘤关系紧密。因此，提高生物制品的病毒检测能力既能够保证疫苗等生物制品的安全，又可以避免或减少由于SV40感染引发肿瘤的情况。

目前，国外临床已经有应用RQ-PCR方法检测临床样本中SV40感染的检测，以及分析猴源性生物制品(如脊髓灰质炎减毒活疫苗)的SV40污染情况。PCR技术由于其快速、安全且具有较高敏感性和特异性等优点被广泛应用。我国药典中对于SV40的检测提供了PCR的检测方法，但在实际工作中发现存在扩增效果不佳的情况，极有可能出现漏检，而且PCR检测在整个检测过程中，对操作人员、精密实验仪器和整体实验室设施的要求都有较高的技术要求，不适合基层大规模筛选检测。而传统的分离培养检测技术培养时间较长，操作过程相对复杂，要在无菌条件下操作，并对操作者的相关专业知识和操作技术要求都比较高，限制了这种方法在临床以及非实验室环境的应用。免疫荧光检测则是灵敏度不够稳定，需要进一步改进与完善。

综上所述，为了实现生物制品的批量检测，分析SV40病毒的感染状况，迫切需要发展方便快捷、高灵敏度、高特异性和适宜于临床筛查的诊断方法以及研制相应的检测试剂来满足SV40病毒的检测需要，这对于控制SV40传播和人民用药安全具有深远意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服上述现有技术的缺陷和不足，提供一种特异性和灵敏度高、选择性好、检测速度快的分子信标-G四链体光学传感器。该分子信标-G四链体光学传感器通过连续监测荧光信号强弱的变化，来即时测定待测样品中SV40病毒目标双螺旋DNA特异性产物的含量，为SV40病毒快速检测产品的开发提供了一定的理论指导，对SV40病毒的临床监控具有重要意义。

本发明的目的是提供一种分子信标-G四链体光学传感器。

本发明的第二个目的是提供上述分子信标-G四链体光学传感器在检测SV40病毒中的应用。

本发明的第三个目的是提供一种检测SV40病毒的方法。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

一种分子信标-G四链体光学传感器，包括分子信标，所述分子信标呈发夹结构，其包括能与荧光染料结合发出荧光的G-四链体序列、能与目标双链DNA特异性结合的环状区，以及能阻止G-四链体结构形成的茎状区；