[发明专利]一种银杏酸类成分的制备方法

说明书

本发明公开一种银杏酸类成分的制备方法，其采用在线收集和循环高速逆流色谱模式进行分离纯化，制得纯度高于95％的银杏酸类单体；最后将未完全分离的两个银杏酸单体进行制备液相色谱分离。高速逆流色谱分离所用到的条件是：溶剂系统为正庚烷：乙酸乙酯：甲醇：乙酸＝5:4:1:1，高速逆流色谱仪柱体积为300mL，上样量500mg，转速800转/min，上相为固定相，下相为流动相，流速2.0mL/min，检测波长254nm。本发明成本低于现有技术，操作简便，效率高，可以较大批量从银杏果皮中分离制备出纯度大于95％的银杏酸类单体化合物方法。

技术领域

本发明涉及中药有效成分的高效制备方法，具体为一种银杏酸类成分的制备方法。

背景技术

银杏酸类化合物是银杏中叶、白果和果皮中除了黄酮和内酯外的另一类重要的药效成分，是 6-烯基水杨酸的衍生物。现代药理研究表明，银杏酸类成分具有抗病毒、抑菌、抗炎、抗癌、抗寄生虫等多种药理活性。由于银杏酸成分是一种低极性结构类似物，分离难度高。目前，传统的单体成分的分离方法包括硅胶柱色谱、制备液相色谱、大孔树脂和 CO₂临界萃取法等，杨长龙等，研究发现采用高效液相色谱法制备分离银杏酸，分离到的银杏酸中存在大量的脂肪酸；尹秀莲，银杏外种皮中银杏酸的分离技术研究，大孔树脂 S-8 分离银杏酸的纯度为 85.59%，然后又采用 CO₂临界萃取法分离到的银杏酸的纯度为 77.66%，两方法分离纯度都不高；后来有学者对工艺不足进行改进，张敏敏，通过改进后的乙醇提取法对银杏酸进行提取，然后用膜分离技术对其进行纯化，获得的银杏酸的纯度由 33.9% 提升至 77.8%。可见，以上方法费时费力、污染环境、样品纯度低，而且样品通过反复柱层析对有不可逆性吸附作用，分离得到银杏酸类化合物单体制备效率低、成本较高；所以，仍需继续寻找新的简单高效的方法制备高纯度的银杏酸。

高速逆流色谱（High-speed Counter-current Chromatography，HSCCC）是近 30年发展起来的一种连续的无需任何固体支持物的高效、快速的液-液分配色谱分离技术，它避免了固态支持体或载体带来的样品易被死吸附、损耗和变性等各种问题，使用其它液相色谱法进行制备型分离时，其分配效率会显著降低，溶剂消耗量大，HSCCC 保证较高峰型分辨度，分离量大、样品无损失、回收率高、分离环境缓和，节约溶剂。高速逆流色谱能直接进大量粗提样品或合成混合物，分离结果能达到相当高的纯度，已广泛应用于生物、医药、环保等领域化学物质的制备分离和纯化。目前尚无采用高速逆流色谱用于制备分离银杏酸类单体化合物。

发明内容

本发明的目的就是为了解决上述技术背景中的不足，本发明公开一种制备成本低于现有技术，操作简便，效率高，可以较大批量从银杏果皮中分离制备出纯度大于95%的银杏酸类单体化合物方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案来实现：

一种银杏酸类成分的制备方法，它包括以下步骤：

（1）将银杏果外种皮与白果分离，外种皮置于阴凉处干燥，干燥后的外种皮采用石油醚提取三次，得到总银杏酸提取物；

银杏酸是低极性化合物，本发明利用低极性的石油醚，根据相似相容的原理，使外种皮提取效率最高，同时对于其它类型的有效成分，如黄酮和银杏内酯类成分不会被提取出来。

（2）将总银杏酸类成分采用在线收集和循环逆流色谱模式进行分离纯化，制得纯度高于 95%的银杏酸类单体。

银杏酸是一类低极性结构类似物，不同的化合物间仅在于脂肪链的长度和双键位置的不同，长脂肪酸链结构决定了银杏酸类化合物极性极小，可适用的逆流色谱溶剂体系较少，因此常规的逆流色谱分离方式很难将这些结构类似物一次分开，而本申请公开的循环逆流色谱模式体系可以完全分离纯化杏酸。

（3）将未完全分离的银杏酸单体进行制备液相色谱分离。

优选地，所述步骤（2）的操作步骤为：