[发明专利]一种快速微生物抗生素敏感性检测方法

说明书

本发明提供的一种快速微生物抗生素敏感性检测方法，采用不同浓度的待测抗生素分别与待测微生物悬浮液混合并孵育，与不含待测抗生素的阳性对照相比，当活体待测微生物受抗生素抑制细胞个数降低的百分率达到20％以上时，对应的所述待测抗生素的浓度为待测微生物的最小抑菌浓度；本发明提出的上述的快速微生物抗生素敏感性检测方法，所述方法可在3小时内即确定待测微生物的最小抑菌浓度(MIC)，且与常规的方法测定的结果一致，测定的结果稳定可靠，可以在短时间内测定微生物对抗生素的敏感性，适合于临床实践，解决了现有技术中的微生物抗生素敏感性检测方法时间长，不适于临床实践的缺陷，且成本低，易操作，应用范围广。

技术领域

本发明属于微生物耐药性检测领域，具体涉及一种快速微生物抗生素敏感性检测方法。

背景技术

微生物在抗生素等外部环境压力下的响应特征，对生态安全性评估等十分重要，一直以来受到人们的关注。由于抗生素的滥用，微生物的耐药问题越来越严重，并快速在全球范围内广泛传播，因此，在响应特征中，目前最受关注的是微生物的耐药性。合理使用抗生素是应对微生物耐药的最核心工作，而快速的微生物抗生素敏感性检测是重中之重。因此，人们开发和应用了各种快速检测方法，用于测定抗生素敏感性或者最小抑制浓度(MIC)。

抗生素敏感性检测的本质是观察抗生素对细菌生长、新陈代谢和繁殖的影响，根据体外试验观察到的抗生素对细菌生长、新陈代谢和繁殖的影响的情况，结合临床和药代学的情况推断未来用药的有效性。传统方法有扩散法和稀释法，稀释法在培养基中添加不同浓度的抗生素，通过肉眼观察液体培养基浊度或固体培养基上菌落生长情况来评估微生物对抗生素的抑制特性。上述方法的缺点是耗时较长，一般培养需要过夜，样品或试剂消耗量较大。除了上述方法之外，还可以采用E-test抑菌试纸条，通过在试纸条上固定浓度梯度的抗生素，结合平板培养方法，通过抑菌圈与纸条交点读出MIC值。上述抑菌试纸条的缺点是同样是培养时间较长。由上述可知，传统的抗生素敏感性检测方法的检测时间均较长，不能迅速的给予病患有效的治疗方案，限制了其应用广泛性。

为了缩短抗生素敏感性检测时间，国内外进行了大量的研究，已经探索了多种抗生素敏感性检测方法，如质谱法、振动悬臂微生物细胞称重法、等温微量产热法、磁珠旋转法、微滴检测法、实时PCR法、微阵列法、RNA测序法和噬菌体法等。但上述的方法目前只处于研究阶段，仅能进行小样本分析，并且都需要专业技术人员操作，仪器昂贵，并且是非传统的专业设备，操作复杂，性能不稳定，成本高，使用不方便，还不能广泛的应用。目前，临床上多采用全自动抗生素敏感性检测方法，其中法国梅里埃公司VITEK系统和美国BD公司Phoenix系统是最快的检测系统，其原理是光学比浊法或比色法，两个系统的可靠性和准确性已被证明，VITEK系统平均检测时间为9.8小时，Phoenix系统平均检测时间为12.1小时。上述两系统的检测时间虽然已经大大缩短，但考虑到医生工作流程和作息时间，实际上医生只能在第二天根据检测结果针对性选择用药，不能尽快的将经验性广谱抗生素治疗切换为靶向治疗，容易延误病情，导致病患死亡或提高医疗成本。鉴于质谱技术和核酸技术临床广泛应用，使细菌鉴定快速化已经基本实现，因此，上述的两系统的抗生素敏感性检测时间制约了临床实践。

为此，本发明提出了一种快速微生物抗生素敏感性检测方法，可以在短时间内测定微生物对抗生素的敏感性，适合于临床实践。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中的微生物的药敏检测时间长，不适于临床实践的缺陷，从而提供一种快速微生物抗生素敏感性检测方法，可以在短时间内测定微生物对抗生素的敏感性，适合于临床实践。

为此，本发明提供了一种快速微生物抗生素敏感性检测方法，采用不同浓度的待测抗生素分别与待测微生物悬浮液混合并孵育，与不含待测抗生素的阳性对照相比，活体待测微生物受抗生素抑制细胞个数降低的百分率达到20％以上时，对应的所述待测抗生素的浓度为待测微生物的最小抑菌浓度。