[发明专利]与绵羊多羔相关的SNP分子标记及其应用

权利要求书

1.一种特异性引物组合或含有所述特异性引物组合的试剂盒在绵羊分子辅助育种中的应用；所述育种为选育产羔数多的绵羊；所述特异性引物组合为：

上游引物F：

5’-ACGTTGGATGTCTCAGGAGAGGAGAGGCAG-3’；

下游引物R：

5’-ACGTTGGATGTCTGCAGAAGTGGTTCGAGC-3’；

延伸引物的核苷酸序列如下：

S1：5’-TGGCCCGCCGCTT-3’；

所述特异性引物组合或含有所述特异性引物组合的试剂盒用于检测与绵羊多羔相关的SNP分子标记；所述与绵羊多羔相关的SNP分子标记位于绵羊第15号染色体第856850bp处，该SNP分子标记的多态性为A/C。

2.一种特异性引物组合或含有所述特异性引物组合的试剂盒在鉴定绵羊多羔性状中的应用；所述特异性引物组合为：

上游引物F：

5’-ACGTTGGATGTCTCAGGAGAGGAGAGGCAG-3’；

下游引物R：

5’-ACGTTGGATGTCTGCAGAAGTGGTTCGAGC-3’；

延伸引物的核苷酸序列如下：

S1：5’-TGGCCCGCCGCTT-3’；

所述特异性引物组合或含有所述特异性引物组合的试剂盒用于检测与绵羊多羔相关的SNP分子标记；所述与绵羊多羔相关的SNP分子标记位于绵羊第15号染色体第856850bp处，该SNP分子标记的多态性为A/C。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取待测绵羊的基因组DNA；

2)以待测绵羊的基因组DNA为模板，利用上游引物F和下游引物R，进行PCR扩增反应；

3)用SAP酶对PCR扩增产物进行消化；

4)以消化后的PCR扩增产物为模板，利用延伸引物进行延伸反应；

5)分析延伸产物，从而对绵羊多羔性状进行判定。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤2)中PCR扩增反应使用的反应体系以5μL计为：20-50ng/μL基因组DNA 1μL，10×PCR反应缓冲液0.5μL，25mmol/L MgCl₂ 0.4μL，25μmol/L dNTPs 0.1μL，PCR Primer mix 1μL，5U/μL Taq DNA聚合酶0.2μL，去离子水补齐至5μL；

PCR扩增反应的扩增程序为：95℃2min；95℃30s，56℃30s，72℃60s，45个循环；72℃5min。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤3)中对PCR扩增产物进行消化，使用的SAP酶消化体系以2μL计为：SAP Buffer0.17μL，SAP Enzyme 0.3μL，去离子水补齐至2μL；

反应条件为：37℃40min，85℃15min，25℃保存。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤4)中延伸反应的体系以2μL计为：iplex Buffer 0.2μL，Terminator mix 0.2μL，Extend primer mix 0.94μL，iplex Enzyme0.041μL，去离子水补齐至2μL；延伸反应的条件为：

(1)94℃30s；

(2)94℃5s，

(3)5个内部循环：52℃5s，80℃5s；

步骤(2)-(3)一共40个外部循环；72℃3min。