[发明专利]一种检测致病性弧菌的试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测致病性弧菌的试剂盒，涉及致病性弧菌检测技术。该试剂盒包括如下引物对中的一种或多种的组合：SEQ ID NO.1‑2、SEQ ID NO.3‑4、SEQ ID NO.5‑6、SEQ ID NO.7‑8、SEQ ID NO.9‑10、SEQ ID NO.11‑12、SEQ ID NO.13‑14、SEQ ID NO.15‑16、SEQ ID NO.17‑18以及SEQ ID NO.19‑20；利用该试剂盒可对常见的致病弧菌如霍乱弧菌、副溶血性弧菌、创伤弧菌、拟态弧菌、河流弧菌、溶藻弧菌等进行检测，避免非特异性扩增，具有较强的特异性和较高的灵敏度。

技术领域

本发明涉及致病性弧菌检测技术领域，具体而言，涉及一种检测致病性弧菌的试剂盒。

背景技术

食源性疾病是当今世界上最广泛的卫生问题之一，发病率居人类各种疾病首位，世界卫生组织(WHO)的数据表明，食源性和水源性腹泻病每年导致约220万人死亡，其中多数是儿童；在工业化国家，每年有超过30％的人口患有食源性疾病。

致病性弧菌(Pathogenic Vibrio)是一类重要的食源性病原菌，广泛存在于自然水环境，特别是海水中，对海产品有较大程度的污染。我国沿海省份有着广阔的海域和丰富的海产品，居民爱吃海产品，历来有生食或半生食贝类、甲壳类等海产品的习惯。近年来进出口海产品中致病性弧菌的检出屡见不鲜，致病性弧菌污染引起的食源性疾病爆发已成为突出的公共卫生问题，严重危害人民的身体健康并造成经济财产损失。

致病性弧菌主要包括霍乱弧菌(Vibrio cholerea,V.c)、副溶血性弧菌(Vibrioparahemolyticus,V.p)、创伤弧菌(Vibrio vulnificus,V.v)、河流弧菌(Vibrioflurialis,V.f)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus,V.a)、拟态弧菌(Vibrio mimicus,V.m)等12种。前两种弧菌危害大、致病率高。霍乱弧菌是一种古老而流行广泛的烈性病原体之一，被WHO定为国际检疫菌；近年来以肠道门诊监测为基础的食源性疾病主动监测结果显示，副溶血性弧菌是导致食源性疾病发病最多的细菌性病原微生物；创伤弧菌、河弧菌、溶藻弧菌、拟态弧菌等致病性弧菌的感染亦十分普遍。报道指出浙江省进口食品被创伤弧菌污染食品引起的食物中毒是最为严重的食源性疾患之一，免疫力低下患者致死率达50％～60％；河流弧菌在我国沿海地区海水中检出率约为6％～15％，海产品中检出率为4％～5％；溶藻弧菌数量位居海水类弧菌之首，能够引起食物中毒、中耳炎、败血症、脑膜炎等严重疾病而未受到重视；拟态弧菌腹泻症状与霍乱弧菌所致腹泻症状极为相似，典型症状都是米泔水样便。

目前致病性弧菌的检测方法有标准检测和快速检测两种，其中标准方法主要基于生理、生化指标，利用在高盐条件下产酸、产气以及生长代谢方面等特性进行鉴定。这些方法操作步骤繁琐，对操作人员技术水平要求比较高，且检测的周期长，在相当大的程度上限制了致病性弧菌快速检测、鉴定的能力。随着分子生物学技术的发展，许多方法如PCR、酶联免疫荧光方法、胶体金方法等已经应用到致病性弧菌的检测中，大大的缩短了检测的周期。在这些技术的基础上又开发了AFLP、RFLP等方法。这些检测方法的建立在一定程度上提高了检测的效率，缩短了检测的周期，但是上述技术也存在各自的弊端。如PCR方法易出现污染导致假阳性结果，而且一些阳性结果还需要测序鉴定；酶联免疫荧光技术存在检测灵敏度不高等缺点。随着人民生活水平的提高，消费者对食品卫生提出了更高的标准，单一弧菌的检测方法已不再适用现今多重检测的迫切需求。有研究发现创伤弧菌可能与副溶血性弧菌一起通过牡蛎等海水产品复合感染生食者。虽然北欧食品协会的“食品中致病性弧菌的检测和计数”分别规定了4种致病性弧菌的检测方法，但仍难以反映海产品被其他致病性弧菌污染的真正状况。

现在国内关于致病性弧菌的国家标准和行业标准检测方法仅限于传统的微生物学检测方法，每种检测方法只能检测一种致病性弧菌。而国外的传统微生物学检测方法(如FDA、AOAC、ISO等)也是以检测单一或少数目标菌为目的设计的程序。每检测一种致病性弧菌都需配制不同的培养基和试剂，费时费力。