[发明专利]航天器总装大气环境微生物数量实时检测方法

说明书

本发明公开了一种航天器总装环境空气微生物中细菌、真菌含量的实时检测方法，先利用基于激光诱导荧光法，检测获得微生物的直径大小和数量信息，微生物不区分真菌和细菌，同时，利用国标法培养并测量得到真菌和细菌含量；将两者进行对比，形成对应关系，分别利用插值方法获得两种采集方法细菌和真菌各自对应的函数关系，当需要实时检测空气中细菌、真菌含量时，利用荧光法实时采集再通过函数关系，计算得到国标法中培养获得的细菌和真菌含量。本发明检测过程自动化，无需人工参与，数据可靠，效率高。

技术领域

本发明属于微生物检测技术领域，具体涉及一种基于激光诱导荧光(LaserInduced Fluorescence，LIF)法的航天器总装环境空气真菌、细菌含量实时检测方法。

背景技术

目前，微生物检测比较常用的手段为现场采样后使用培养基进行培养计数(GB4789.2-2010)。该方法需要将样品采集到培养基上，经恒温培养数日，然后人工计数获得细菌、真菌菌落总数。采用这种方式耗时长，时效性差，无法及时的反应微生物真、细菌含量，且当空气中微生物含量较大时，如采样量过大，由于培养基的限制，会出现生长出的菌落数量过密无法统计的情况。

除国标法外，目前微生物检测还有一种光学检测方法——激光诱导荧光法(参考文献：《激光诱导荧光技术及其在生物仪器中的应用》)，激光诱导荧光法原理是用特定波长的激光束照射待检测空气中的颗粒物，所有的活性、非活性粒子均发生米氏散射，散射光束经光学聚焦后由散射检测器检出并转换为电信号，经过后续的算法处理后，获得颗粒物的大小和浓度信息。同时激光光束激发空气中活性颗粒(微生物体)内所含的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide hydrogen，NADH)，核黄素和吡啶二羧酸(孢子)等发出荧光，经光学聚焦后被荧光检测器检出并转换为电信号，经后续处理后获得微生物的含量信息，此技术已得到较为成熟的应用，但存在一定的缺陷，无法区分微生物中真菌、细菌含量。

上述两种方法均存在一定的局限性，无法实现空气中的真菌、细菌含量的实时检测(国标法可检测真菌、细菌数量，但检测周期很长，激光诱导荧光法只能得到微生物总数，无法区分真菌、细菌)。细菌和真菌虽同属微生物，但在形态和特性上却有着很大的不同。其中最重要的区别是细菌没有核膜包围形成的细胞核，属于原核生物；真菌有核膜包围形成的细胞核，属于真核生物。一般来说，原核细胞尺寸较小，直径一般为1μm-10μm；真核细胞较大，直径一般为10μm-100μm。由此从微生物大小尺寸的角度，寻找真菌、细菌的比例与微生物大小的比例之间的相关关系，可通过设置不同的开关值(如10μm)来区分真菌、细菌。本发明提出一种基于激光诱导荧光技术的航天器总装环境空气真菌、细菌含量实时检测方法，该方法通过基于激光诱导荧光法和培养法两种检测方法在同一地点同时采样分析，分别获得微生物数据，对两组数据比对获得函数对应关系，应用该函数关系，可直接应用激光诱导荧光技术实时获得空气微生物中真、细菌含量，为制定微生物控制方案及采取控制措施提供实时数据支持。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种基于激光诱导荧光法的航天器总装环境空气真菌、细菌实时检测方法，解决了现有采集方法不能实时获得真菌、细菌数量的问题。

本发明是通过如下技术方案实现的：

航天器总装环境空气微生物中细菌、真菌含量的实时检测方法，包括如下步骤：

1)利用基于激光诱导荧光法的检测设备，检测获得微生物的直径大小和数量信息，微生物不区分真菌和细菌；

2)进行步骤1)的同时，在同一时间、相同地点利用国标法对空气采样，封装后到实验室进行培养，得到真菌和细菌含量；

3)在多个地点进行步骤1)、步骤2)两种方法检测工作，分别获得数据；