[发明专利]用于生产重组融合蛋白的辅助蛋白、编码基因、重组融合蛋白、重组表达载体及制备方法

权利要求书

1.一种用于生产重组融合蛋白的辅助蛋白，其特征在于：为氨基酸序列如SEQ IDNO.1、SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示的蛋白，或为与氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的蛋白具有85％以上同源性的蛋白。

2.一种权利要求1所述的辅助蛋白的编码基因，其特征在于：为核苷酸序列如SEQ IDNO.4、SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.6所示的基因。

3.一种包含权利要求1所述的辅助蛋白的重组融合蛋白，其特征在于：所述重组融合蛋白包括从N端到C端依次连接的辅助蛋白—连接肽—目的多肽，所述辅助蛋白为权利要求1所述的辅助蛋白，所述目的多肽的等电点范围为3-9和/或氨基酸个数为20-80个，所述连接肽为蛋白酶切割位点或化学物质切割位点。

4.根据权利要求3所述的重组融合蛋白，其特征在于：所述目的多肽包括促生长激素神经肽、血管紧张素I、血管紧张素II、胰高血糖素、胰高血糖素样肽-2、生长激素、促胰液素以及前述物质的衍生物。

5.根据权利要求4所述的重组融合蛋白，其特征在于：所述蛋白酶包括凝血酶、烟草蚀纹病毒蛋白酶、3C蛋白酶、肠激酶、胰蛋白酶和赖氨酰肽链内切酶，所述化学物质包括溴化氰、羟胺和甲酸。

6.根据权利要求3-5任意一项所述的重组融合蛋白，其特征在于：所述连接肽包含六个组氨酸组成的组氨酸标签序列，所述组氨酸标签序列位于所述连接肽的氨基酸序列的N端或C端。

7.根据权利要求3-5任意一项所述的重组融合蛋白，其特征在于：所述重组蛋白为氨基酸序列如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.9或SEQ ID NO.11所示的蛋白。

8.一种权利要求7所述的重组融合蛋白的编码基因，其特征在于：为核苷酸序列如SEQID NO.8、SEQ ID NO.10或SEQ ID NO.12所示的基因。

9.一种重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体由载体和权利要求8所述的编码基因重组而成，所述载体为pET系列载体。

10.一种权利要求3-7任意一项所述的重组融合蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)根据核苷酸序列合成重组融合蛋白的编码基因；

(2)将所述重组融合蛋白的编码基因插入载体，得到重组表达载体；

(3)将所述重组表达载体转化入宿主菌，得到重组工程菌；

(4)培养所述重组工程菌，加入IPTG诱导重组融合蛋白表达，得到含有所述重组融合蛋白的菌体；

(5)将步骤(4)中含有所述重组融合蛋白的菌体离心，取上清，得到上清一；

(6)将上清一加热，加热温度为60℃-100℃，离心，取上清，即得重组融合蛋白。