[发明专利]Ph+急性B淋巴细胞白血病KQBL-84细胞株及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种Ph+急性B淋巴细胞白血病KQBL-84细胞株，其特征在于，其分类命名为KQBL-84细胞株，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2018164。

2.如权利要求1所述的KQBL-84细胞株，其特征在于，其由携带人融合基因BCR-ABL的MSCV-P210逆转录病毒感染C57bl/6供体小鼠的骨髓细胞，而获得稳定表达BCR-ABL人原癌基因的原代细胞系，经筛选和培养，获得高致癌性且可稳定遗传的前体B细胞系。

3.一种Ph+急性B淋巴细胞白血病KQBL-84细胞株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤A：从供体C57bl/6鼠中获取正常的骨髓细胞；

步骤B：利用携带人BCR-ABL融合基因的MSCV-P210逆转录病毒载体，制备高效价病毒并感染步骤A中获取的骨髓细胞，获得感染后的骨髓细胞；

步骤C：将正常C57bl/6受体小鼠进行致死剂量γ辐照清髓处理；

步骤D：将步骤B获得的感染后的骨髓细胞经尾静脉注入受体小鼠体内，得到B-ALL的发病小鼠；

步骤E：筛选步骤D处理后的发病小鼠中发病严重且伴有胸水的小鼠，并进行流式分析和病理鉴定；

步骤F：分离步骤E鉴定成功的发病小鼠的胸水进行细胞体外培养；

步骤G：将步骤F分离得到的胸水经细胞裂解液裂解，收集细胞，再经体外筛选培养后，得到可稳定遗传的细胞株，命名为KQBL-84细胞株。

4.如权利要求3所述的构建方法，其特征在于，步骤B中的所述感染液包括：MSCV-P210病毒49-50wt％、FBS 7.0-7.5wt％、WEHI 4.5-5.0wt％、100x，1M，PH＝7.4的HEPES 0.9-1.0wt％、100×Pencilin/Strep 0.9-1.0wt％、500×1mg/ml Polybrene 0.15-0.2wt％、1000×1mg/ml Ciprofloxacin 0.09-0.10wt％。

5.如权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤B进一步包括以下步骤：

步骤B1：取4mL所述感染液重悬细胞，并转移至6孔板中；

步骤B2：37℃，1000g离心力，水平转子离心90min；

步骤B3：放置细胞培养箱，37℃，5％CO₂，4h；

步骤B4：收集步骤B3处理后的细胞至50mL离心管中，并且用2mL PBS润洗细胞培养皿，并将残余的细胞一并收集到离心管中；

步骤B5：300g，离心10min，去除上清液，用5-10mL PBS重悬细胞，得到感染后的骨髓细胞悬液，并且进行细胞计数，根据细胞总数，将细胞密度调整至5×10⁶个/mL。

6.如权利要求3所述的构建方法，其特征在于，步骤C中所述正常受体小鼠的辐照处理方法为：采用11Gyγ-ray的致死照射剂量分两次对受体小鼠进行照射，每次5.5Gy，中间隔3h。

7.如权利要求3所述的构建方法，其特征在于，步骤D中所述的受体小鼠处理方法为：用1mL医用注射器，通过尾静脉向每只正常受体小鼠体内注射200μl所述感染后的骨髓细胞悬液。

8.一种Ph+急性B淋巴细胞白血病KQBL-84细胞株的应用，其特征在于，所述KQBL-84细胞株用于构建小鼠原发B-ALL肿瘤模型。

9.一种Ph+急性B淋巴细胞白血病KQBL-84细胞株的应用，其特征在于，所述KQBL-84细胞株用于费城染色体阳性(Ph+)这部分急性B淋巴细胞白血病发病机理的研究。

10.一种Ph+急性B淋巴细胞白血病KQBL-84细胞株的应用，其特征在于，所述KQBL-84细胞株用于费城染色体阳性(Ph+)这部分急性B淋巴细胞白血病发病机理的研究。