[发明专利]超大孔径层析介质在纯化病毒颗粒的应用

说明书

本发明提供了超大孔径层析介质在纯化病毒颗粒的应用，所述超大孔径层析介质带有离子交换功能基团，所述超大孔径层析介质的粒径≥40μm。超大孔径微球的离子交换层析树脂比现有技术的类似层析介质具有显著提高的病毒颗粒结合载量和结合速度，从而能提高吸附一洗脱层析模式病毒颗粒纯化效率，同样也可以提高流穿层析模式时病毒去除效率。

技术领域

本发明属于纯化领域，具体涉及一种超大孔径层析介质在纯化病毒颗粒的应用。

背景技术

病毒颗粒纯化在基因治疗以及疫苗开发和生产领域不可缺少的环节。除病毒纯化外，病毒和病毒样颗粒的去除是治疗性蛋白质下游加工中的重要问题。尽管有多种分离技术应用于病毒纯化与去除，层析分离法已被证明为潜在的比传统的密度梯度超速离心法更为有效的手段。吸附-洗脱(bind-elute)模式的层析分离在病毒载体及疫苗纯化工艺中得到广泛应用，而流穿模式(flow-through)的层析方法则成为治疗性蛋白质(包括单克隆抗体和融合重组蛋白)下游生产工艺中去除病毒的普遍选择。

纯化用层析介质一般由多孔微球树脂组成，主要有水凝胶类树脂(比如琼脂糖类)或者合成聚合物类树脂(比如聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯等)。

多糖类微球类层析填料，是目前国内外最常用的生化分离介质。琼脂糖分子不带电荷，具有良好的亲水性，能够提供生物兼容的界面环境；分子中丰富的羟基可被继续修饰，形成离子交换、疏水、亲和等多种不同类型的介质。但是，琼脂糖介质作为一种软凝胶微球，介质孔径一般小于50nm，介质球含水量通常在90％以上，在高压、高流速下会发生变形，严重影响分离效率。

多孔的聚合物微球，可以以单体为原料合成，通常由悬浮聚合形成刚性的微球结构，能够承受较高的流速与压力。通过调控聚合单体和聚合工艺，可有效控制聚合物微球的孔道结构与界面特征。孔径范围一般为10-30nm。用于层析分离时，由于孔径较小，流动相在孔道内的传质过程主要依靠分子扩散完成，传质速度慢；不利于分离大分子的生化技术产品。现有技术的纯化用层析介质通常孔径在以下。例如，目前市场上层析介质知名品牌的Sepharose Fast-Flow(GE Healthcare)树脂的平均孔径一般远小于(参考文献：Yao Y，LenhoffAM.J Chromatogr A.2004 May 28；1037(1-2)：273-82)。现有技术制备的大孔径层析树脂如POROS微球(ThermoFisher)以及UNOsphere微球(Bio-Rad)，平均孔径也只有将近(参考文献：Trilisky EI.Stationary and mobile phase selectionfor ion-exchange chromatography of viruses[Ph.D.]University of Delaware；Newark，DE：2009)。

伴随着生物技术的发展，层析介质及分离纯化工艺也面临许多新的挑战。当面临超大分子纯化，常规琼脂糖凝胶和聚合物微球介质由于孔径尺寸较小，无法满足分离的需要。例如纯化多亚基疫苗分子、病毒颗粒、类病毒颗粒等，目标物粒径通常为几十到几百纳米，因此需要开发超大孔径层析树脂(大于)来纯化或者去除病毒颗粒。

发明内容

本发明应用超大孔径(大于)层析树脂来纯化或者去除病毒颗粒，本发明所述方法中病毒回收率高达65％左右，工艺稳定，易于放大。

为实现上述技术目的，本发明的技术方案是，超大孔径层析介质在纯化病毒颗粒的应用，所述超大孔径层析介质带有离子交换功能基团，所述粒径≥40um。

优选的，所述超大孔径层析介质的孔径在之间。

优选的，所述超大孔径层析介质的粒径在50～80μm之间。

优选的，所述超大孔径层析介质的基材是聚苯乙烯-二乙烯苯共聚物或者聚甲基丙烯酸酯共聚物。

优选的，所述超大孔径层析介质带有的离子交换功能基团为DEAE。