[发明专利]一种抑制山羊副流感病毒3型复制的靶标位点序列及其应用

说明书

本发明涉及一种抑制山羊副流感病毒3型（CPIV3）复制的靶标位点序列及其在制备抗山羊副流感病毒3型药物中的应用。所述抑制山羊副流感病毒3型复制的靶标位点序列位于干扰素调节基因2（IRF2）的3’UTR中，其核苷酸序列如SEQ ID NO:19所示，受bta‑miR‑222序列直接靶定，从而降解IRF2的mRNA，降低IRF2蛋白的表达量，提高Ⅰ型干扰素表达水平，抑制CPIV3增殖。该靶标位点序列为研发新的治疗因CPIV3引发的疾病的抗病毒药物提供了一个新的药物靶点。此外还可应用于评价bta‑miR‑222调节IRF2转录水平，以及培育抗山羊副流感病毒3型转基因羊方面。

技术领域

本发明属于分子生物学和抗病毒学领域，具体涉及一种抑制山羊副流感病毒3型复制的靶标位点序列及其在制备抗山羊副流感病毒3型药物中的应用。

背景技术

山羊副流感病毒3型(caprine parainfluenza virus type 3,CPIV3)属于副黏病毒科呼吸道病毒属的新成员，为有囊膜的单股负链RNA病毒。同属成员还包括人副流感病毒1型和3型(HPIV1、HPIV3)、仙台病毒(SV)和牛副流感病毒3型(BPIV3)。该病原于2013年起在江苏、安徽等地的山羊养殖场中检测到，CPIV3感染的羊可引发不同程度的呼吸道疾病，RT-PCR扩增测序其N、M、F和HN基因发现，这些基因与HPIV1和HPIV3的同源性仅为76.9％-83.5％。随后本实验室将分离鉴定的CPIV3进行山羊致病性试验，结果得出，CPIV3感染的山羊出现咳嗽、流鼻涕、发热和精神沉郁等临床症状，并出现持续性的病毒血症和排毒，剖检可见肺脏和气管出现较严重的病理损伤，并且CPIV3能通过气溶胶水平传播，使相邻圈舍健康羊出现呼吸道症状，并可检出病毒血症和排毒，这给养羊业健康发展带来了新的威胁。本实验室的流行病学调查发现，CPIV3病原核酸检出率达44.7％，抗体检出率达39.3％。因此，该病原对养羊业的危害应该引起足够的重视。但到目前为止，仍未见关于治疗该病药物的报道。

微小核糖核酸(microRNA,miRNA)是一类长度约19-24nt的内源性非编码RNA，其参与调控细胞分化、增殖、代谢及凋亡的各个环节，并与动物机体生殖发育、肿瘤形成及病毒感染过程密切相关。成熟的miRNA被RNA诱导的沉默复合物(RISC)识别并结合，通过与靶mRNA的5′UTR、3′UTR或编码区碱基互补结合，从而降解mRNA或抑制mRNA翻译成蛋白质，达到发挥基因转录后的调节功能的作用。近几年来，miRNA在抗病毒治疗中得到了广泛的研究。

研究发现，bta-miR-222在CPIV3感染细胞样品中出现显著下调(7.4倍)，但是bta-miR-222调节病毒增殖作用尚无人报道。基于此，我们对bta-miR-222进行过表达和抑制表达试验分析发现，bta-miR-222可显著抑制CPIV3在MDBK细胞中的复制。因此，本发明可能为治疗由CPIV3引发的呼吸道疾病提供新的治疗方法或药物靶标，这将会有较大意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是:提供一种抑制山羊副流感病毒3型复制的靶标位点序列及其在制备抗CPIV3复制药物中的应用，该序列位于干扰素调节基因2(IRF2)的mRNA上，可受bta-miR-222序列直接靶定，从而降解IRF2的mRNA，降低IRF2蛋白的表达量，提高Ⅰ型干扰素表达水平，抑制CPIV3增殖。

为解决上述技术问题，本发明提供一种抑制山羊副流感病毒3型复制的靶标位点序列，该靶标位点位于IRF2的3’UTR中，其核苷酸序列如SEQ ID NO:19所示。

优选的，上述靶标位点受bta-miR-222序列直接靶定，所述bta-miR-222核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

进一步地，所述抑制山羊副流感病毒3型复制的靶标位点序列在制备抑制山羊副流感病毒3型复制的药物中的应用。

bta-miR-222序列在制备抑制山羊副流感病毒3型复制的药物中的应用。