[发明专利]一种检测食品中碧根过敏原的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法

说明书

本发明公开了一种检测食品中碧根过敏原的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法，该层析试纸条包括依次组装的吸水垫、硝酸纤维素膜、金标垫和样品垫，还包括承载底板；硝酸纤维素膜上设有检测线、抗原线和质控线，金标垫上含有胶体金标记的一种抗碧根蛋白单克隆抗体，硝酸纤维素膜的检测线上包被另一种捕获抗碧根蛋白的单克隆抗体，抗原线包被碧根蛋白，质控线包被羊抗鼠IgG；当试纸条出现一条质控线、一条抗原线是阴性，出现检测线（不管有没有抗原线）都是阳性，与现有碧根蛋白过敏原检测技术相比，灵敏度高，特异性强，还可以对过敏原的浓度做出直观的评价，可直接用于食品检测。

技术领域

本发明涉及食品安全检测技术领域，尤其涉及一种检测食品中碧根过敏原的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法。

背景技术

碧根，分类学上称为胡桃属，属于核桃科，是坚果致敏原。在许多的食品加工中都存在碧根，这可能会引起潜在的致敏危险。相关报道，在山核桃中已经描述了两种过敏原蛋白，包括2S白蛋白，Car i1（16kDa）和11 S豆球蛋白，Car i4（55.4kDa）。山核桃过敏原Cari1被确定为来自山核桃的最耐消化蛋白质。目前碧根过敏检测方法有ELISA、免疫传感器检测技术、实时荧光定量PCR技术、SPR，质谱技术等，这些检测方法对仪器设备、表面环境、操作人员等有很高的要求并且检测时间较长、费用高，因而新型快速稳定的试纸条检测的建立是十分必要的。

胶体金免疫层析技术(colloidal gold immunochromatography assay, GICA)一种将胶体金标记技术、免疫检测技术和层析分析技术等多种方法有机结合在一起的固相标记免疫检测技术。1971年Faulk 和Taylor首次将胶体金标记技术引入免疫组织化学，胶体金标记技术得到了快速发展。目前，由这一技术开发出的胶体金检测试纸已广泛应用于临床诊断、药物检测、环境污染等领域。

发明内容

本发明的目的在于研制一种能快速且无害的检测食品中的碧根过敏原试纸条，不仅能检验出食品中微量的过敏原蛋白，也可运用于食品加工过程的质量管控，如进料、生产过程及成品检测，提前预防不必要的过敏困扰。

本发明是基于一对能够检测碧根蛋白的相互配位的单克隆配对抗体，这对单克隆配对抗体由美国BioFront公司提供，通过制备40nm胶体金，标记纯化后的抗体，优化各项层析条件等完成了该试纸条发明。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种检测食品中碧根过敏原的胶体金免疫层析试纸条，包括吸水垫、硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫的地板。

一种检测食品中碧根过敏原的胶体金免疫层析试纸条，所述的吸水垫、硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫之间相互交叠连接。

一种检测食品中碧根过敏原的胶体金免疫层析试纸条，所述的金标垫上固定一种抗碧根蛋白单克隆抗体-胶体金标记物，所述的硝酸纤维素膜上依次包被有与胶体金标记的抗碧根蛋白单克隆抗体处于不同表位的另一种抗碧根蛋白单克隆抗体检测线、抗原线和羊抗鼠IgG质控线。

一种检测食品中碧根过敏原的胶体金免疫层析试纸条，所述的一种抗碧根蛋白单克隆抗体-胶体金标记物中的单克隆抗体的浓度为2-8μg/mL。

一种检测食品中碧根过敏原的胶体金免疫层析试纸条，所述的检测线中另一种抗碧根蛋白单克隆抗体的浓度为1-2.5mg/mL。

一种检测食品中碧根过敏原的胶体金免疫层析试纸条，所述的抗原线是由用0.01mol/L，pH为7.0-8的PB溶液包被碧根蛋白划膜得到，其中碧根蛋白的浓度为25000-600000ppm。

一种检测食品中碧根过敏原的胶体金免疫层析试纸条，所述的质控线中羊抗鼠IgG浓度为0.5-1.5mg/mL。

一种检测食品中碧根过敏原的胶体金免疫层析试纸条，制备方法包括以下具体步骤：