[发明专利]用于组织纤维的染色试剂盒及染色方法在审

专利信息
申请号: 201810863914.9 申请日: 2018-08-01
公开(公告)号: CN108760444A 公开(公告)日: 2018-11-06
发明(设计)人: 李立科;蒋小龙;陈其云 申请(专利权)人: 迈克生物股份有限公司
主分类号: G01N1/30 分类号: G01N1/30
代理公司: 北京派特恩知识产权代理有限公司 11270 代理人: 王子晔;张颖玲
地址: 611731 四*** 国省代码: 四川;51
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摘要:
搜索关键词: 染色 染色试剂盒 复合染色 酸性品红 醋酸水溶液 结缔组织 蓝色染色 磷钼酸水溶液 摩尔浓度比 混合红色 三氯化铁 三色染液 盐酸溶液 常规的 甲基蓝 染色液 苏木精 苏木素 染料 纤维 观察 申请
【说明书】:

本申请公开了一种染色试剂盒及其对结缔组织染色的染色方法。所述染色试剂盒包括:Weigert铁苏木素染色液,其包含A液和B液,其中A液为苏木精溶液,B液为三氯化铁‑盐酸溶液;红色复合染色液,所述红色复合染色液为包含丽春红、酸性品红和比布列西猩红的混合红色染料的醋酸水溶液;磷钼酸水溶液;和蓝色染色液,所述蓝色染色液为甲基蓝醋酸水溶液,其中,所述红色复合染色液中,丽春红的浓度为4.0‑16.5M,酸性品红的浓度为1.5‑10.0M,比布列西猩红的浓度为5.0‑13.0M,前提是所述丽春红和所述酸性品红的摩尔浓度比为1.5‑3.0。经本发明染色试剂盒染色的结缔组织,红色部分染色清晰度比常规的三色染液有显著的提升,对比度高,易于精确观察。

技术领域

本发明涉及病理特殊染色领域,特别涉及结缔组织的染色。

背景技术

结缔组织由细胞和大量细胞外间质构成,在体内广泛分布,具有连接、支持、营养和保护等多种功能,因而具有重要意义和功能。一般意义上的结缔组织仅指固有结缔组织,包括疏松结缔组织、致密结缔组织、网状组织和脂肪组织。大量的间充质中包括多种纤维,主要有胶原纤维、网状纤维和弹性纤维。这三种纤维广泛分布于身体各处,常见于器官与器官之间,组织与组织之间以及细胞与细胞之间。

常规的苏木精-伊红(HE)染色不能对结缔组织的各种纤维进行区分染色,因而在病理诊断上常常需要借助于特殊染色进行鉴别。不同的染料和不同纤维之间的作用机制是不同的。例如,网状纤维对银离子有选择亲和性,可用银离子吸附后还原为黑色的金属银而染色;胶原纤维可以通过HE染色而呈现红色;弹力纤维可通过Verhoeff铁苏木素染色而呈现黑色,细胞核为蓝色,而胶原纤维呈红色。用于结缔组织染色的常用方法有多色染色,例如Van Gieson(V.G.)染色可使胶原纤维呈现红色、肌纤维呈黄色、细胞核为蓝黑色或灰色;Mallory三色染色法可使胶原纤维为蓝色、神经胶质纤维、肌纤维和酸性颗粒为红色,髓鞘为红色或桔红色;Masson(马松)三色染色可使胶原纤维为绿色或蓝色、肌纤维为红色、细胞核为灰蓝色或灰黑色。

常规的Masson三色染色法是依次采用Weigert铁苏木素或Regaud苏木素、Masson复合染色液(通常包括酸性品红,为了使红色鲜艳还可加入丽春红)以及亮绿或苯胺蓝三种染色液进行染色。具体方法是用Weigert铁苏木素或Regaud苏木素对经复水处理好的切片进行染色5-10分钟,水洗(过染的情况下也可用盐酸酒精分化处理)后用Masson复合染色液染色5-10分钟,然后用约1%磷钼酸溶液分化处理3-5分钟,最后用苯胺蓝或亮绿染色液进行染色约5分钟,最后用冰醋酸水溶液洗涤,脱水、透明化后用中性树胶封片保存。

Masson染色条件要求苛刻,对于包含不同类型的细胞和纤维的组织,特别是病理组织,需要能更为鲜明地区分不同细胞和纤维的染色试剂盒和染色方法。特别是常规Masson三色染色法对肾小球内免疫复合物及肾脏内胶原纤维增生等病理组织染色浅淡,使基底膜、系膜、胶原纤维及胞质、红细胞颜色对比不够鲜艳。此外,由于红色染色不够鲜艳导致红色肌纤维、胞质与蓝色胶原纤维之间不易区分,对比度差。

发明内容

因此,本发明的第一方面的目的是提供一种对结缔组织,特别是包含肿瘤病变的组织能更加有效染色的Masson三色染色试剂盒。

为此,本发明提供了一种染色试剂盒,包括以下试剂:

Weigert铁苏木素染色液,其包含A液和B液,其中A液为苏木精溶液,B液为三氯化铁-盐酸溶液;

红色复合染色液,所述红色复合染色液为包含丽春红、酸性品红和比布列西猩红的混合红色染料的醋酸水溶液;

磷钼酸水溶液;和

蓝色染色液,所述蓝色染色液为甲基蓝醋酸水溶液,

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