[发明专利]一种纳米多孔微支架的制备方法及其复合体系

权利要求书

1.一种纳米多孔微支架的制备方法，其特征在于：

所述纳米多孔微支架为纳米载体-海藻酸钠三维多孔微支架；

所述制备方法包括以下步骤：

(1)介孔二氧化硅纳米颗粒的合成：

在圆底烧瓶中加入Pluronic P-1233～9g、去离子水125～130mL和浓HCl18～25mL，剧烈搅拌1.5～4h，充分混匀后将烧瓶置50℃水浴中，搅拌下加入正硅酸乙酯5～10g，搅拌20h，接着升温至80～85℃，静置恒温24～30h；然后离心，用去离子水洗涤沉淀，干燥后在马弗炉中煅烧；

(2)纳米载体-海藻酸钠三维多孔支架的制备：

将改性海藻酸钠溶解于去离子水中，与介孔二氧化硅纳米颗粒混合均匀；将混合液置于4℃后置于-20℃，冷冻干燥；加入氯化钙溶液，PBS浸洗后再次冷冻干燥，密封干燥保存；

(3)纳米载体-海藻酸钠三维多孔微支架的制备：

将纳米载体-海藻酸钠三维多孔支架置于离心管中，加入液氮，快速用均质仪将支架破碎；待液氮挥发完全后，加入氯化钙溶液，反应后进行过滤，将所得颗粒进行冷冻干燥，即得纳米载体-海藻酸钠三维多孔微支架。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述纳米载体-海藻酸钠三维多孔微支架具有三维多孔结构，支架为微球，最小能做成直径为1mm的微球，孔径根据具体组织特性需求调整，孔径范围为50～300μm。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述改性海藻酸钠为RGD多肽共价接枝修饰海藻酸钠，其改性方法包括如下步骤：

将EDC/NHS加入海藻酸钠溶液，于室温搅拌4h后，加入RGD多肽搅匀后于4℃静止过夜；接着将该溶液转入透析袋透析3d后冷冻干燥24h；密封，-20℃储藏。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)的具体操作为：将改性海藻酸钠充分溶解于去离子水中，使其终浓度为1.5％w/v，与生物活性物质修饰的介孔二氧化硅纳米颗粒混合均匀；将混合液置于4℃放置1～4h，后置于-20℃放置8～20h，冷冻干燥24～48h；加入终浓度为2％w/v的氯化钙溶液，交联15min，PBS浸洗3次后再次冷冻干燥12h，密封干燥4℃保存。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，液氮加入量为离心管容积的10％～45％；氯化钙溶液的终浓度为2％w/v，交联反应2～15min；采用均质仪高速破碎支架所用转速为20,000～40,000rpm，高速破碎30s～2min。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，所述过滤采用孔径1.2～1.5mm的标准筛。

7.一种纳米多孔微支架复合体系，其特征在于：所述复合体系含有权利要求1-6任一项所述的制备方法制备得到的纳米多孔微支架。

8.根据权利要求7所述的纳米多孔微支架复合体系，其特征在于，所述复合体系的制备方法包括以下步骤：

将制备好的纳米载体-海藻酸钠三维多孔微支架浸泡于PBS中；过滤掉PBS，将纳米载体-海藻酸钠三维多孔微支架复合体系转移至注射器中，塞上注射活塞，冷冻干燥后密封保存。

9.根据权利要求8所述的纳米多孔微支架复合体系，其特征在于：

转移至注射器前还包括在微支架中滴加少许低浓度海藻酸钠溶液充分混匀的步骤；

所述浸泡于PBS中的温度为4℃，时间为48h；然后过滤掉PBS，将纳米载体-海藻酸钠三维多孔微支架复合体系转移至1mL注射器中，塞上注射活塞，冷冻干燥后4℃密封保存。