[发明专利]一种利用CRISPR/Cas9系统对水稻PHYB基因定点突变的方法

说明书

本发明涉及一种利用CRISPR/Cas9系统对水稻PHYB基因定点突变的方法，属于植物基因工程技术领域。本发明利用CRISPR/Cas9技术，对水稻光敏色素PHYB基因进行定向编辑，通过设计PHYB突变靶点、构建表达载体，并利用农杆菌介导法导入水稻，实现了对水稻PHYB基因的定点突变，该方法操作更加简单快捷、试验周期短，为快速创制抗旱和耐盐水稻新品种提供了一种简单有效的技术手段，对改良水稻性状和高产稳产育种具有重要实践意义。

技术领域

本发明涉及一种利用CRISPR/Cas9系统对水稻PHYB基因定点突变的方法，属于植物基因工程技术领域。

背景技术

光是影响植物生长与发育的重要环境因子之一，可调节植物生长和发育的各个过程。植物通过光受体感知并传递光信号，目前在植物中已至少发现4种光受体：光敏色素、隐花色素、向光素和紫外线-B受体(Chen M，Chory J，Fankhauser C.Light signaltransduction in higher plants[J].Annual Review of Genetics，2004，38(1):87.)。其中光敏色素主要感受红光和远红光，其主要以红光吸收型(Pr)和远红光吸收型(Pfr)两种形式存在。在黑暗条件下，光敏色素主要以Pr形式存在，红光照射后可使Pr转化为活性的Pfr形式(Rockwell N C，Su Y S，Lagarias J C.Phytochrome structure and signalingmechanisms[J].Annual Review of Plant Biology，2006，57(1):837-858.)。具有活性的Pfr构像光敏色素可进入细胞核中，与光敏色素互作因子相互作用，调节下游基因的表达(Rockwell N C，Su Y S，Lagarias J C.Phytochrome structure and signalingmechanisms[J].Annual Review of Plant Biology，2006，57(1):837-858.Leivar P，Quail P H.PIFs:pivotal components in a cellular signaling hub[J].Trends inPlant Science，2011，16(1):19-28.)。