[发明专利]多孔微支架制作方法及在组织再生修复中的应用

权利要求书

1.多孔微支架的制作方法，其特征在于：所述多孔微支架为海藻酸钠三维多孔微支架；

所述海藻酸钠三维多孔微支架的制备方法包括以下步骤：

(1)海藻酸钠三维多孔支架的制备：

将改性海藻酸钠溶解于去离子水中，置于4℃后置于-20℃，冷冻干燥；加入氯化钙溶液，PBS浸洗后再次冷冻干燥，密封干燥保存；

(2)海藻酸钠三维多孔微支架的制备：

将海藻酸钠三维多孔支架置于离心管中，加入液氮，快速用均质仪将支架破碎；待液氮挥发完全后，加入氯化钙溶液，反应后进行过滤，将所得颗粒进行冷冻干燥，即得海藻酸钠三维多孔微支架。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述多孔微支架应用于 组织再生修复中，所述组织再生修复为在缺损组织部位有一定量的相应组织的细胞增殖、分化、形成新的组织；

所述海藻酸钠为改性海藻酸钠；

所述海藻酸钠三维多孔微支架采用液氮速冻高速破碎法制得；

所述海藻酸钠三维多孔微支架在组织再生修复中的应用的具体使用方法为：向制备好的微支架中加入微支架总体积50％～80％的PBS，得到可注射微支架，将其注射于损伤组织部位。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：

所述改性海藻酸钠为RGD多肽共价接枝修饰海藻酸钠；所述改性海藻酸钠的改性方法包括如下步骤：

将EDC/NHS加入海藻酸钠溶液，于室温搅拌4h后，加入RGD多肽搅匀后于4℃静止过夜；接着将该溶液转入透析袋透析3d后冷冻干燥24h；密封，-20℃储藏；

所述海藻酸钠三维多孔微支架在组织再生修复中的应用的具体使用方法中，还包括在微支架中滴加少许低浓度海藻酸钠溶液充分混匀，再转移至注射器。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述海藻酸钠三维多孔微支架具有三维多孔结构，支架为微球，最小能做成直径为1mm的微球，孔径根据具体组织特性需求调整，孔径范围为50～300μm。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：

步骤(1)中，所述改性海藻酸钠为RGD多肽共价接枝修饰海藻酸钠，其改性方法包括如下步骤：

将EDC/NHS加入海藻酸钠溶液，于室温搅拌4h后，加入RGD多肽搅匀后于4℃静止过夜；接着将该溶液转入透析袋透析3d后冷冻干燥24h；密封，-20℃储藏；

步骤(2)中，液氮加入量为离心管容积的10％～45％；氯化钙溶液的终浓度为2％w/v，交联反应2～15min；采用均质仪高速破碎支架所用转速为20,000～40,000rpm，高速破碎30s～2min；所述过滤采用孔径1.2～1.5mm的标准筛。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述组织包括心肌、肝脏、胰腺、神经、组织工程皮肤、成骨、软骨、脊髓、组织工程耳朵和膀胱；

所述多孔微支架在组织再生修复中的应用通过以下四种方式使用：

一，不包埋任何组织细胞直接注射到相应的部位；二，微支架中包埋某一组织的组织细胞，然后注射到相应的部位；三，微支架中包埋具有治疗作用的蛋白、多肽或小分子，直接注射到相应的组织；四，以上三种混合使用；

所述多孔微支架应用于制备组织再生修复材料、制备促进干细胞增殖材料、制备提高干细胞贴壁性能材料、制备促进干细胞分化材料、制备促进组织自我再生修复材料。