[发明专利]鹌鹑成纤维细胞培养基及其制备方法

说明书

本发明属于未分化的脊椎动物细胞或组织培养基技术领域，具体涉及一种鹌鹑成纤维细胞培养基。所述鹌鹑成纤维细胞培养基，包括DMEM培养基、鸡尿囊液提取液、胎牛血清和黄芪多糖注射液。本发明的培养基成本低，能够明显促进鹌鹑成纤维细胞的增殖；采用该培养基培养鹌鹑成纤维细胞，效率提高，且成活率高。

技术领域

本发明属于未分化的脊椎动物细胞或组织培养基技术领域，具体涉及一种鹌鹑成纤维细胞培养基及其制备方法。

背景技术

组织工程是将工程学原理和生命科学相结合，研究开发用于组织和器官修复、改善和功能维持的生物替代物（“组织工程皮肤发展现状”，杨维等，中国科学：生命科学，2015年第45卷第5期，第460-470页，公开日2015年12月31日），用于修复、维持或改善机体形态和功能的一门新兴的交叉学科（“组织工程皮肤构建的研究进展”，孙锦章等，国际外科学杂质，2006年第33卷第5期，第389-393页，公开日2006年12月31日），属于再生医学范畴。临床上对组织器官的大量需求，促进了组织工程研究及其产业的快速发展（“组织工程皮肤发展现状”，杨维等，中国科学：生命科学，2015年第45卷第5期，第460-470页，公开日2015年12月31日）。其中，组织功能皮肤是组织工程迄今为止最成功的产品之一，由原代培养的皮肤细胞和细胞外间质（英文简称ECM，主要为胶原蛋白）组成，是有活性的皮肤，是应对供体皮肤匮乏的有效策略，可避免受伤部位体液流失和感染，并可以促进细胞因子和生长因子的分泌，从而加速伤口愈合（“组织功能皮肤的现状和展望”，郝文丽等，背景生物医学工程，2016年第35卷第1期，第94-99页，公开日2016年02月29日）。

种子细胞作为组织工程的基本要素，其黏附、增殖能力、分化程度及免疫特性是生物活性皮肤构建过程中需重点考虑的问题。目前，用于构建组织工程皮肤替代物的种子细胞主要有表皮细胞、成纤维细胞和干细胞等。其中，成纤维细胞的生物学作用广泛,增殖快,黏附力强,同时因为成纤维细胞、特别是胎儿来源的成纤维细胞免疫原性低,不引起机体明显的排斥反应,因此，成纤维细胞是目前皮肤组织工程应用最为广泛的种子细胞（“组织工程皮肤种子细胞的研究进展”，孙强等，感染、炎症、修复，2008年第9卷第1期，第55-57页，）。成纤维现阶段，种子细胞的大规模体外培养是组织工程皮肤研发中需要解决的一大问题（CN103911339A，公开日2014年07月09日）。传统的用于鹌鹑成纤维细胞培养的细胞培养基要添加20％的胎牛血清，才能促进鹌鹑成纤维细胞更好地生长，而胎牛血清价格昂贵，获取困难，多依靠进口。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种鹌鹑成纤维细胞培养基，该培养基成本低，能够明显促进鹌鹑成纤维细胞的增殖，同时，能够提高鹌鹑成纤维细胞在体外培养的适应能力，减少细胞脱落、死亡。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

鹌鹑成纤维细胞培养基，包括DMEM培养基、鸡尿囊液提取液、胎牛血清和黄芪多糖注射液。

所述DMEM的英文全称为dulbecco's modified eagle medium，中文译名为改良杜氏伊格尔培养基，是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。与MEM比较增加了各种成分用量。

发明人意外发现，将以上培养基用于鹌鹑成纤维细胞培养，能够明显促进鹌鹑成纤维细胞增殖。同时，能够提高鹌鹑成纤维细胞在体外培养的适应能力，减少细胞脱落、死亡。

进一步，所述鸡尿囊液提取液为孵化的鸡蛋中的尿囊液冻融后离心得到的上清液。

进一步，所述孵化的时间为5-12天。

进一步，离心的转速为500-1000转/分钟，时间为5-10分钟。

进一步，以体积百分比计，配比关系为：65%-75%DMEM培养基、5%-15%胎牛血清、15%-25%鸡尿囊液提取液和1%-5%黄芪多糖注射液。